analisis clinicas (2014)

Apunte Catalán
Universidad Universidad de Barcelona (UB)
Grado Farmacia - 2º curso
Asignatura analisis clinicas
Año del apunte 2014
Páginas 64
Fecha de subida 30/11/2014
Descargas 63

Descripción

analisis clinicas academia

Vista previa del texto

Analisls Cliniques i Diagnostic de Laboratori Centre d'Estudls ATP ©® HEMATOLOGIA d Tema 10. Generalidades/Hemograma JiS-- I,,;;,?~ Sangre: es un tejido de caracterfsticas Ifquidas constituido por elementos formes (celujas) en suspension en un medio Ifquido (plasma) (soluci6n acuasa de protefnas lIamada pla,~rii~5;( Eritrocitos (hematfes, globules rojos),)plaquetas (trombocitos);:>leucocitos [globules ,br~QfP~) ""'" ~ "T>.r.- "'" '<'-' r.>/ cx:rrzocc~ .
Plasma' • 55 % AI centrifugar la sangre Hematapoyesis: .": '::;"f':::-;~:.
'}Celulas de la sangre: 45 procesa .
I. -" _ n -rf3-g.\\=l.on·~ '<, ' ,'.
~~i::< ," :) t)':~;:~t~;'c\ ~\.C • .,~ { .
.,., de formaci6n d'e las celulas sg. Tienelugar -., .• --_ en la med'Jr~ osea.
" -.p(2Q ,:"! celula jncdr-e pluripotencial:t ,~.
%-';:;li{f~~~J~~:'~j/ •..
y le.c<COS &R...
k ~elYle11)c.,~ Stem Cell) ..•.•. ;..
CFUmeg J~lb PLT'~-ro a)'Nalorar j, b) ··'f cada serie par separado .
V~lcirar las tres series conjuntamente 1 Centre d'Estudis ATP ©® -.
Centre d'Estudis Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori ATP ©® SERlE ROJA = ERITROCITOS: Disco biconcavo. Forma discoide aplanada. Diametro: 7-8 /-lm.
~(anucleados) ni organulos citoplasmaticas.
•• Vida media: 120 d (= 4 meses).
• VCM = go fL aproximadamente • Contienen Fe2 + en el grupo hemo para poder captar e~ II L.;::, ~~cl<O Celula madre p\uripotencial ,;<!g~~ e).
~ ,(C~"~E~;c.~eJ ~ .
R~ticulocito Eritroblasto.\ C~~" 'J "r £(Yt~lO ~1'-" <U QtcM.O) !~\Al<A~}~~~~_' M.O~ ESTUDIO DE LA SERlE ROJA: Incluye: 1. Recuento Cw Q0E:(n(IC:S de eritrocitos --J ·;S ~\R-(E£ absoluto _' (RBC i?.
p~ eoce".et4r~' ~'d = Red Blood cellyJ'por unidad de volumen de sangre.
(tt Hombre 4,5-6 rv- e(\~cj'~S --c ~'t-,f)hJd.~) 2.
Hb (g/L) -b ;;;,.
~~~~~i~(n~-DS del volumen de T~s~ritr.pEitaria respecto centrifugaclon = hematocrita GHJ,f;v iPO,3~JO,50 L/L ~cJela~s 3. Determinacion ~;i'J.i:!;;c .':l;!,~", isocitosi (IDE cP ere ,,--."-7--'.
= fY'r~~e:s al plasma obtenido } de .La distribuciqHl~~,eTamapos Ips rritwsjtsg.es una curva gaussiana cuya amplitud es de 10-15,5%'e~}$~;,~,i~ianes normales. (Sl nos pos;ernas.-n F:::,n.4SOc:~~).
;;;;:~=~~t~ ~~~~cl~S~'C0~ - Tarnblen se cakulan C~n~~ par - •.-~;:;;;", -, .
.
...
~~a~ 10 Adulto 80-95 fL nQeritrocitos . 1012 300-350g/1 Hemoglobina Hematocrito l!.emoglobina Analisis Clfniq ues i Diagnostic de Laboratori .2 Centre d'Estudis ATP ©® Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori Centre d'Estudis ATP ©® Alteraciones de ,Iforma: • Poiquilocitosis ~ eri''\(\Jc::l:~'S ~ tr'- IDiptQk~ hematfes Ca i J6'('{\~.
con extremos redondeados.
ereditaria) 0 tb se presentan e~I!!~~~~1! ,;.i-};~ • Equinocitos, acantocitos (espiculados): enfermedades hepaticas, ins,Uficienciarenal • ~.
Rouleau", hematfes en pHasde moneda~ G ~P~ -= Tfp~~ tr 4!~;:~~~"'S c:.'e Coloracion irregular: coloracion depende del •• •• Hipercromia = policromasia = policro Normocitosis,'~~6~106fl Macrocito'sis >100 fl .. ':''':! Permite clasificfr.)~.~"anemias --!:=>Anemi'15 = alteracion de la conc de Hb acompafiada siempre de descenso de HTCy tb casi siempre del n° de eritrccitos: . :.~ Anemia rriacrccftica: VCM> 97 fL Anemia normocftica: VCM= 80-97 fL Anemia microcftica: VCM < 80 fL Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori 3 Centre d'Estudis ATP ©® Anallsls Clfniques i Diagnostic Centre d'Estudis de laboratori SERre RQJA - ALGORlTMO ANEMIA ~ l») Hb ~~~-.-l ! de referencle 01( pi J/ t ( (q ~ J = vclcres L-..I ~ 1 Ftl ~O -f~ \1 ~.
1 ~ ££ ~ 'H~ (j) (t- F"'l"t'itina. ibcja AWEMLQ.
MlCROcIncA FERROl"ENICA OJ( Dclermiooci6.n: Vit BI2 i acido f6Jko- vrt .9\2 i~idh fdljcG )J.
ANEMIA MA(:RQCITICA MEGALOBU\SUCA ATP ©® Analisls Cliniques i Diagnostic Centre d' Estudis ATP ©® de Laboratori \oe) B) Sfndromes rnlelodisplasicos (\)CM -:> C) Otras: hipotiroidismo, aicoholismo, hepatopatfa cronica, feos.
D) . Hemorragias agudas :;"; " Anemias hemolfticas (AH) AH microangiopatica: presenta esquistocitos y plaquetopenia / • Eliptocitosis hereditaria: presenta eliptocitos y ovalocitos (50-9({~)!:" •• AH autoinmune • Esferocitosis hereditaria E) -, ·;..•.
i .. ··;· \.~}:;:;;i\;':~~:H" ~.
Presencia de'inclusiones eritrocitarias:':',/""/ CU,erpos de Howell-Jolly: inclusiones puntiformes de color oscuro.
'.
• Parasites: mas frecuente Plasmodium r80 ';~.C1Aez.\€ eJ.)~h~(e-> .
(~JJ.fA)..
• Anillos de Cabot: inciusiones filamentosas de color azul 0 rosas.Forma circular eu ~ ~ ~(l..:cl"U.l 0 00.
®® 6~ • ~~,,,\};:~~1f'!;, ~~~~'f~~ • Punteado basofilo: inciusionespuntiformes de color a~Lirp~Qj9as.a' ribosomas agrupados.
Frecuente en diversas anemias hemolfticas y tb en int:B.~!$ad'6~1c'ronicapar plomo (satumismo ~ f3:\ .
'.
6. ure {lA'. tAeu.<5~~ @~\Rel]culoCitos.
S ri."""O~ .. f'L...41'\ tx: ) ~ ,.
Son Idsl~t~\oJ~nes~~e~'~m~Vle r.'I~ nl~- ~" .ai?f~Jd.1 ~,'~ \e f(").
Manualmente: Se tifien con azul de"l " • ~ bri!lcfl,te = Col~:lranteVITAl.J:- = Contado.~es ~;~~£Mll:~~~os: Determinacion de @tulocitos 'Reactivo ;; R'0x 1M Q.....
Q..,<'V~.
~~.'C~j~~~~ ~g~rmand~ '.'.' ,/l~~~f~;.[:~·:~:i/ • 0 ~ '-~ (naranjaq~~:;o~~91;;:~;~~/' Hacen dos medidas secuenciaf~'5'~it~?'~,i:Ifnpedancia.
.
~~&??\''-~!i[~fFluorocitometrfa de flujo (mide contenido de RNA) .::, r /1~i~;4:?;c".( ';:..:;_::- TRATAMIENTODE LASANG~E:~:Sgdirecta de punclon venosa '.~" 0 capilar, ~gl "ante Ir E~te~,sion 0 frotis:.~,~n~'~(~6f~e~.porta y exte~derf.or~,ando un.a cfpa fina. n ,ft~ IOdos. pe.r-D Fljacion: con s~lu~loQ.~g,~May-~undwald (2 min) y tmcion con ~Iemsa ~20 rnin) ; (1C> '6e>::s, ~Tlc":\<0c.~"S.
3. Observar el frot.is"con Objetivo de poco aumento (X10) para apreciar la calidad de la tincion y la distribucion de 'i~~:~e,IJlas.
1.
~2.
t ~~,b'~~(ifD~) , ',' Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori 5 Centre d'Estudis ATP ©® I F ku.co ~'1Q ~~n"'t~CJ..~ .
Centre d'Estudis ATP ©® ,~ Analisis Clfniques i Diagnostic de Labcratori ees;. ~e*-f'2::S SERlE BLANCA - LEUCOClTOS;;;:D ~ ce\J.~S d.~ •• Componentes mas escasos en la sangre. (4-10' G(( \ 0 '1/( •• No son hornogeneos, hay 5 tip os agrupados en dos grupos: polimorfonucleados eoslnofilos y basofilos) y mononucleares (linfocitos y monocitos).
(neutrofilos, Para su estudio: ,:::;'ljZ:\~' \z ~.
109/L) 4. ~ 1°) Recuento del nurnero de leucocitos 2°) Se obtiene la formula leucocitaria.
por unidad de volumen.
Se pueden expresar .
4-10 '109/L,·,<n:~~:,}i~\;.
en valor absoluto dE' o.~A,~.~d<t.d c..1(.<?,\~ .;;{"'·{:;c'i:;\,,' ~e.ecil 3°) Estudio morfologico al microscopio: Se mira: volumen, Tarnafio Relacion N/C .
Citoplasma Tarnafio Afinidad azurofila Mb Cranulos 'i ~~ 2 tamaiio frotis sangufneo"':'~{ y forma ~~ucleo, Neutrofilos hematfes regularidad e~'T~..:- del CitOP;l~,S.~}i::;;';,~~·· Bas6filos (ci-o,5%)\;/ 1,5- 2 hematfes (45-70%) <1 <1 Extenso Ausente Regular Muclios, azurofilos y neutrofilos Extensor.?!l.~·· Ausente ..,~,,,, R~\ul~~;:;ii!f:r., .' egros (recubren nucleo) Niicleo Situacion Cromatina Central Nucle-:.:o::l.:::o...j.-:-===~"--l \ Mb Exce~ PatoJogfas S'fndromes Oefici~ ,..--'> ..",..",-,=-: ..,.,~ Exceso, miebGdlJ.~!=rati\i~~ Sfndromes .r ' , mieloproliferativos (I ',Je.u<f.
..
i>;"~~~\~:-''- Agranulocitoslji"NeJtt~penias f Tamafio Relacion NjC Citoplasma Tamafio Afinidad azur6fila Mb'.
Extenso Pocointensa Regular AzurOfilos finos NucJeo \fCUOffi Situaclo Crorfi~trna·, )'Nu21'(qtsF .Mb ,.~ Ausente 2 lobules Exceso nflamaciones cr6nicas 0 agudas ~~y!=emia monocftica Leucemia mielomonocftica ,~ fndromes Parasitosis, Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori > Excentrlco Calada Ausente rnieloproliferativos alergias, inmunoterapia 6 Centre d'Estudis ATP ©® Analisis Cllniques i Diagnostic de Laboratori Centre 'En\) c,-~t:!fi.<t.~-ro\.) ~t'h- '. ca..-- f\,~Y:j"f~'«~1 -=):ss Linfocifos (20-40%) -1,-'\,~t\~ Linfocitos .
Grandes Tamafio <2 hematfes Relaci6n N/C Citoplasma Tarnafio Afinidad azur6fila Mb Granules =1 <1 Delgado Poco intensa Regular Ausentes Extenso Ausente Regular Azur6filos Central Densa Ausente Regular Excentrico ATP ©® d'Estudis .L~-Q~~) GranuJares «10%) ,::)4':J°r" >2 hematfes NucJeo Situaci6n Cromatina Nucleolo Mb Densa Ausente Regular . ff50~~~';" Patologfas Exceso Viriasis, lnmunoterapias, hemopatfas linfoides Eosin6filos Exceso En viricfsis IQ!J1u~[f~rapia con IL2 .:s~·ifc'l)tcl.e'Tcf~splantes /~:$<,G~p:Ei?halmente en leucemia 1o.,1·4<~- '....,.,/" 0,05 - 0,5 Bas6filos Linfocitos Monocitos En ninos ('109 L p con LGG 1- 5 % 0,0 -1,0 % 20 -40% :l 10 % I J L) Leucocitos /\ ".
Neutrqfilbs<.
EosinMllq's, .,[ 6 - 16 1,5 - 8 0,2 - 0,4 .J\IIQnO'cffos .~..
2-6 arios 6-14 afios 6 -12 2-7,5 0,2-0,4 4,5 -12 2-8 0,2 - 0,4 0-0,01 0-0,01 3-9 2,5 - 8 1,5 -7,0 0,3 - 0,8 0,5 - 0,8 0,4-0,8 j:;: S~=t:\~~:';'e~ '., C5d.o-e.s '~~,/~tl.Qu~~ t ~'"" '+:>a: ~~ Analisls Clfniques i Diagnostic de Laboratori .P" ~ ~e...~ y "'S~~ ~d~a\ e~\ 7 Centre d'Estudis ATP ©® Analisis Cliniques i Diagnostic de Laboratori );> DegraollladOo leycodtaria: \ Puede ser artefacto Centre d'Estudis ATP ©® signo dism6rfico \ "~~ " );> For~aci6n gewacJ&I~s: celulas linfoblastlcas );>.
..
.. . .
~\":-: ~ rmaci6n de complejos ~~ InmunQd1bm,p!: inclusiones globulosas de naturaleza proteica .J::~-~; ,::'~;g~~;:::;;~~~~/ );>Jlofocjto'Wi\jgflosos: ~);> ~.,.~\.O/ ribosornlcos lamelares -""::i0f'" 1\infocit~i con proyecciones activad~ --tf~ amplitud citoplasmatlca, ro~YO'" & ~ ';>~'.'~ - citoplasrnaticas ~ ~ Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori ..
€N \:N ~ n<:::)~~· ~~) .
de los hematfes \IWHI.~ ~~~ .
lA";'~o~()1ecn-J~ __ ~ 8 I\J:) ~"'~~ .
con basofilia y acoplamiento (n:::{)::J()~~\~b C~ \Qj~~~~.
Centre d'Estudis ATP ©® '1' n..: Qr{\~~"'S Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori Centre d'Estudis ATP ©® ALTERACIONES CUANTITATIVAS DE LOS LEUCOCITOS .q Leucocitosis a) Aumento de n° de leucocitos maduros Neutrofilia, basofilia, linfocitosis, eosinofilia, > lto· lo YL • Neutrofilias:>7,5'109/L a) Benignas:~~~~~e....
o Fisiol6gica: embarazo, , monocitosis j'''''' ejercicio, neonatos, estfrnulo ffsico o,p§(8.':lico Infecciones bacterianas desviaci6n a la Gglli~rq~ ~ o n amaciones no infecciosas: neoplasias, quemauras, 0 s=.
o Enfermedades metab6licas: hipertiroiditis, o Fcos: barbituratos, Iitio, corticoides b) Malignas: Neoplasias b) Aumento Mieloproliferativos de n° de leucocitos _ ' " ' ,.,_ ,~~.-;:t bactEiri~Q<:ls r·,,':tiJ2;:;~/ ;' \.oc1k5!C.Gl..c:B) ,~~::c.,> .
'.
t_ t., ~ ,":,:1~1~lJ~'"1- • ,~ o ",LinfocitosiS fisiol6gica de;.a(,i~~Jl"a, ~"I:k e0"S ~o~rvrono~~cleo"51~tn!.eCClos~cr\li(~,~·' -s . (,I\J'ClCJ( \\ vO' o Infecclon por dtornegalovirus, h~patltJ~~;,brucelosls, sffilis o Enfermedad exantematica de lci'li:lfar;Ic'ia .
, diabet~?J?l:;"~~;,~~:;{ i'~:'~'F~';1'( (NMP) "...----._- .........".
,::'C\:t9.' \2. ~~!ne.
inmaduros b.i) Leucocitosis reactivas ~ o Desviaci6n a la izquierda: infecciones o Reacciones leucemoides o Sfndrome leucoeritroblastico b.z) Linfocitosis reactivas !> pos~ratbrios .J~;':.~ 1-) :t:~.~Ft~'?:~~: "K b.j) Leucocitosis patol6gicas '>, \;:".
rCC""'<' .. """"", ,·it o Neoplasias Mieloprolifefati.'{q,s"Cr.6nicos (NMP).
o Leucemias mieloides'1~gyd~~~~jYif' o Sfndromes mielos,¢J?R.la'~icos/rr\ieloproliferativos como leucemia mlelornonocltica cr6nica.
" ::;~&~jt·', ' o Sfndromes linfoprd'l'ife~~tivbs cr6nicos: leucemia linfoide cr6nica (LLC) "'::r:~'.""'·.',._"r.': o Leucemias agudas llnfdides.
G7 .ii'~~'! Q("Q.....~~ 'S· \0 Leucopemas 1-2'109/L v.n;'~4.,,10'109/L ,-- ....~ \~~ '/.
\ abi o Granulopenia (ma~:rm'J;5"iB'egranulocitos) Y\.Q.LA..\'0.Jp'B\~ :,,1 \ ~ i(l o o o Puede haber algd6p,!i!,eosin6filos ' Puede haber~l;T;i.bno'citbsis compensadora Hay que realii~?J~:Xte~si6n de sg periferica para comprobar Anallsis Cllniques ' i Diagnostic ..." de Laboratori 9 por microscopfa Centre d'Estudis ATP ©® Analisis Clinlques i Diagnostic Centre d' Estudis ATP ©® de Laboratori PLAQUETAS Celula precursora mieloide /U:~~i~t Celula precursora de megacariocitos --)100--- Megacarioblasto ( hast!~~j't .1.
jj\;:''.!'~i''._ ., ..:!~.
t.
Megacariocito liberaci6n de .
~l!,>" )\;;I:;;I.;.' ( hasta 64N) ..~, 5000 nGdCD .
,.!)?( ?~ \J.\, v r &lucie \~:~~lt'}l ?'"p,vdO a ~~: 1000 \600' Q;.~p.
"oc\<oc.
Plaquetas Las plaquetas (PLT) o Son pequefios corpiisculos (2-4 Jlm de 0) con forma ~i a Color rojizo. N° variable de granulos ' a 20-25 en cada campo en objetivo de inmersic5n (X1000 .
Determinacion en plaquetas (PlT) a Recuento de PLT: normal 100-400 .
.1Q9/L j':" .• o Se determina Plaquetocrito (PTC):,sl~strar.s9~Q~n del tamaiio de las PQ v.n. = o,12;;OS8 '1"6'2f~/" o Se determina Volumen plaq4~ario~ttt~,9j0(VPM): .-·~if;%\:tt.:c·Jr v.n;~Z~11'1 o iC'jl .
Se determina fndice de distrJbj~~fqp'de las plaquetas (IDP): arriplitud de la distribucic5n de plaquetas '~~':3~~:,,;l' v.n. = 9~16fL ./2:::~~f· ;~~:f~: Alteraciones Analisls Clfniques i Diagnostic de Laboratori 10 Centre d'Estudis ATP ©® Analisis Cliniques i Diagnostic de Laboratori , ' .,- .~", Centre d'Estudis ATP ©® ii, ,. '" ..
, ' emat6logia. Autornatlzaclcn II Tema 11/12.~Met.Q..d.QSJdeestudio en .. - • - - ..
-o .
: •••.....
~ - .
Tipos de muestras o Sangre periferica.
o Medula osea: aspirados, biopsia.
o Sangre de cordon umbilical.
o Productos de leucoaferesis.
o Especfmenes procedentes de tejidos Iinfoides (ganglio, bazo, timo, ). " o Especfmenes procedentes de txs tumorales no Iinfoides (piel, hfgado,et(;:).", o Fluidos corporales: LCR, Ifquido pleural, Ifquido ascltico., <1S;!:::::;j;;,i" o Otros: preparaciones seca, fijadas, incluidas en parafina."!i' La conservacion, tipo de anttcoagulante, aditivos, diluyente; depende de r~;~~~gi.fa;-"quese aplka .
-,:; ..,..,<.
£)~'::;~ll~;~V' Manual: Recuento en carnara cuentaglobulos.
Analisis de la morfologfa: frotis sangufneo, • ati!ZaEl611:~C~f.
• NV~S 'J tiC.SU Ventajas: mas precision y mas exactitud, Totalmente implantadas.
tincion y microscopiQil? 4Y' ) ;f"'-- ' mas rapid,!:};, re"RI'Q9ti,cibilidad.
,%5-' ,.>.
'''''~'f/i . refijado 1.
2.
pa es 0 cameras Rayos laser, Radiofrecuencia, • • •, 2. DrsgerslOn ;<,~}.\ d€ la Juz"",'ti': .G., 3. Metodos ~I ';z,:-;" ' ,;" Las partfculas quedan suspefiqid~~;€h:RJh Ifquido diluyente.
Se realiza un recuento ceIYJ~;~p'or ~dik.dr;d"3tLe.!3}~ Se determlna el n° de partfS.Gi?~por dispersion y el volumen o o 4.
Ctf"'i,'.,_ (i) ;: .; , mSINQFJX"" ,~ , por difraccion .
.,:.:::~>~~,{ ffsicos : radlofrecuend~';las.Jr -".. ~ rJ/l'iTlka Citoqufmica transversal 1J..A<'f"'C O::::~.~CS-~e c::\~ Q..\~ \e OS\\J\8...
o o Proceso qufmico aplica~Q~'preparaciones de celulas en porta Se hace una tinci6ii:t~Y~~'h~~e incidir REM.
@ 0: La absorci ,RE"&t:~sfundon de la reacclon que se produce.
~ 0:, di~tinto progenitores: mieloides, linfoides, monocitoides.
o ' " ",porientes de las celulas: enzimas, prlncipios Inmediatos, C!lt::2..') "'\ O~MCS\ ~ sustancias 5· Analisls @Ifniques i Diagnostic de Laboratori 11 Centre d'Estudis ATP ©® ' Ani!lisis Cliniques . C5\\ Pl.? ~ /0 ~ ~ o ~~ 0 ~ (J par delante de ''ej':''', ,.oJ~,ser focalizado las caract "~~ffsicas de la celula (tarnafio, densidad, complejidad, etc.), '\,/, Realiza un inmunofenotipado de las celulas a partir de sus CD detectados con AcMo y AcPo.
Ventajas: Rapida, objetlva, fiable, uso cuali y cuanti, sensible c"1t//a.x:.t'Q) Muestras generalmente con anticoagulante EDTA -K3' "if ~ J.
t1h ~-::; ~ Perrnite: .~~, Pi::~=i"'E\Ca~~C'1 a) estudlo de enfermedades hernatologlcas " Caracterizacion fenotfpica ri ~g", ~ 92 0 .21 de celulas alineadas impacto produce una serie de senates relacionados con ~ ~ ~ ~ C"I:::J.
ck::~-t'C~ ~ Se hace pasar una suspension '~t.l 1,&1" i ATP ©® G:~~i~;rf~;!~~§;te~;'o~~ , 'f M= ~~~\)." o p /:«: Centre d'Estudis 1 o o o a de Laboratori Se ;:e-~a sobre muestras frescas congeladas previamente fijadas (en porta) Se basa en la deteccion e Identiflcackin de antfgenos celulares mediante anticuerpos monoclonales (AcMo) 0 policionales (AcPo).
, La union Ag-Ac se visualiza mediante una rx enzirnatica qw{produce color.
Valora slrnultanearnente los marcadores Inmunologlcos de la celula y la morfo.!ggfp.
Permite filiar celulas muy inmaduras.
/t""i';~:;; Tecnica my laboriosa (precis a expertos para su realizacion e interpretacio!.1f'~;~~)~iS{~ Complementaria a otras tecnicas.
J"" '~;~'lhii 0 ~ i Diagnostic ,,'7- 'V I 't RUf~ (~\7 ~1iS-";::~ .I<~:;~"',.,,{' .
" , U~ lhCCNG), \E'tb.. \,I\\- ') , " Control de la hematopoyesis (normal'lifQ~qt;~~8~;f ,WU:A 10... ~ Estudio de subpoblaciones Iinfocitari ~<,,"c"i"lWD8,CD5 Control SIDA ~ Control inmunodeficiencias primalf~ Monltorizacion enfermedade tffo',.L.'".~ es Seguimiento de la recuperacld del ~1'J.l8espues de trasplante de M.D. (TMO) &..
Diagnostico y Clasificaclon eJ ~"". ' temias ,> Deteccion y seguimienJC? de~liIDforoas, respuesta al tto.
' 'l''''''~ ""'" if 0" Control de calidad de'lo1i prodrmfos para transfusiones.
saber n° de partfculas y vO![J~-;~lJl?e.I~~mismas C~fWO /G:l-i\.@Il~~) analisis de celula!; y Pdrtfg~JdS:"a~~~ti6ny cuantlficadcn de Ag y celulas tumorales rnonitorizacion de pro,~_ed'lmientosJ(erapeuticos.
, " " ~ b ~ r1 ,') " .. 'F ~ tt E " ~S~ k ~'" ~ LJ :' fj ~ V h! '~ 3'J " Z<JL""", ~: ~r :J u '....I If? ;...' 1)J b) ~ :-, ~ 4 c) (~ ~ ~: ~ d) !l~j4 , '0 9..: tje) '7 separ~:~on ffsica las~~~J as ~~~':~~~~:~_~~~?!:I_0nica y ~~ra \\ §..n_~J~igjtogeneJico..
~.
f) 'Contr61deEM renf~ , Inirnaresidual) -,cenc~ , ere \J~ c:.'C\)S~~e:s .<--~ ,~.
~"\" ~~~~~~:::~i~~s~:~:~~S~I:~t,~; -' _.
=,Histogramas ';~\§1,i~1!Ji\ C~\.
y r-;i!l;rt==~=-~-.0;::===::=:;:::;;::;:::;::;:;::;:;::::::;;::;:;:;:;-' !I ~~ il~ ; , , ~j~ ~.
";;".,", Lfmites de alarffliir \p"\!~, ,< ".;.;t~'.:~!.::...; ~"l!' ~1~ ~ A'~Rt:t.Il(TNt;iVO~' ? Antes d~}~mpJ~,~~,~J' programan , contadores 105 autornatkos con 105 , , v.n. para los diferentes parametres y se pn~fgraman i,;~:~alores limite tanto cuali como cuanti.
'~}:;';, ~ Si 50 1I~~~l~;L?,,(a'ores de alarrna: Salen indicaciones L y~ O\]~'S~ -\- <::~ ~~ ~ s;:)'t::)~ ~~ Anallsis Clfniques i Diagnostic de Laboratori 12 Centre d'Estudis ATP ©® -.f" • Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori ATP ©® Centre d'Estudis 'f -f-> \'IS? Eosin6filos '--TJ (j\)\ G~· CQJ~ J CJ'\ me.
'-l "', ' nCC\e:::> --::> -eAc. ' - .:':-.
Neutr6filos Linfocitos Fuentes de error en fasepreanalftica: o Error al identificar al paciente o Anticoagulante equivocado 0 cantidad inadecuada ,h, o Mala mezcla con eI anticoagulante y aparici6n-deS2;~gJt?'?T!3.\~~ o Diluciones de la muestra (extracci6n en una vfa v~,nB~~ki~j,~aIL'Z'ada) o Aspiraci6n inadecuada del analizador /:,,;;:~~:·,.";~~~r Fuentes de error en fase analftica: o Muestras envejecidas o Resistencia a Ia lisis celular o Disproteinemias o Alteraciones lipfdicas o Muestras hemolizadas ><;5, 't \J-~~\ffi.., - ~\~ (\)A-\) ~~ ~ Hb (SlL'", A}1-:--:" .~!' :.
(j7I <./\~ t •••• -,,~ ,-'" Hb '. roJ~'u~ Fuentes de error en fase postanalftici;i~;f~~~;t;:~"" ')} u; o Uso inadecuadode Ia inforrrfb'ci6n €rtiitida.
"'~l~ Q::O\ l-cr ; Ot'3S -CJI'C£' .::itl(J~ e.i'~'en~ }~ >~i:~~'t;i.
Sistema de Iimitar las fuentes de erii6f..~, AutocontroIes antes de iniSI~f.·i':,t~si6nde trabajo Recuentos par duplicado y tffpnZado Lavados entre muestras-, Verificar resultados c'b'~;:'h,Liestrasde control.
Realizar controIes ide '2]fldird externos .
PQ.
/f"'2£l --\tCP x, /\0 R..fQ.c~IA lf~:H:~J'~ - e.
'/ L .
~a.'03~.
- u:J~"C'j~ '-\-I\() J<.. /\Q ~ I'L " 4 ~~J2,:{,~ , .- ocr, \-\b .'.'C~~~~ u::r. re~(.G.~.
C~ Anallsls Clfniques i Diagnostic de Laboratori .
"~ ~~'\\),:", Cx"'O "\ ~ ! , t=WJ\) '.
13 m~~ ~ "..
Centre d'Estudis ATP ©® ~ - '-~~:/ (L), '"-'"' .
S";.Q;) Co+~~CJ-\rcS.' de Otras Tecnicas de estudio (':)y~efl \k .J:' Analisls Clfniques i Diagnostic de Laboratori complementarias ~ C Centre d' Estudis ATP ©® ~ ~ ()e..~«- ~ ( ~o~fC:,"'S' 'eoo hec&A ~D.~Q~_ Analisis de loslcromosomasI'en metafase, cribado de todo el genoma y detecci6n de los cambios cromos6micos que lrnplican genes responsables de la transformaci6n neoplasica de las celulas Se pueden observar: Traslocaciones, delecciones, duplicaciones, inversiones "",":" o o t~ l3J \..4 ~00\riA, , ~ FISH (hibridaci6n in situ con fluorescencia) Importante en el descubrimiento de anomalias cromos6micas '~~~:::",i'; FISH multicolor = SKY:24 sondas marcadas con fluorescencia '::f;;):;'i"~ HCG (hibridaci6n genornlca comparada): permite detectar cambios en secuenci~'Mje [ tumorales. Se aplica a pequefias secuencias de DNA Array-HGC: similar a la anterior pero aplicable a todo el DNA DNA, st celulas .
BIOlOGfA MOLECULAR o Estudio a escala molecular deltONA y RNA.iEstudia las bases ultra~atructurales 0 submlcroscoplcas subyacentes a los procesos biol6gicos.
' !iJ!;'i' o Tecnlcas: Southern blot (ADN), Northern blot(ARN}, PCR(A#t:m~RT~PCR(ARN),l~cR tempo real ! o o (AND y ARN1,microarrays ~~ , ~~~~~~} Existe marcador molecular en un 40-70% de las enferffi tlades'<Qematol6gicas Utilidad: • • • • '!.
Diag~os:ico pron6stico de las neoplasias t~, MOnIt.o:lza~~on y tto de EMR t Cuantlficacion de EMR par PCR a tempo-s " riesgo de recafda y supervivencia glob~'[;):i) Farrnacogenetlca 'l -,,; . ~.~~ gicas.
WJe; '1-~~ .~~ _".
ermite estratiflcar _ n :)~ ) MJ..~ 'C/ , a 105 pacientes segun > MICROARRAYS{Biochipsomatrices}-=~~ o Muy ~sado en.investi~~:t~tJ'h biomedica.
o Perrnite estudio de JJ~lle.;~~:8,~eneQ o En hemato: permiJ~:aiagnOs!w, predecir respuesta que sentaran'Jp~);1:f~~:~iRara nuevos ttos.
,,;-:."'r - ~ S'Q~ /()~mn-~ ~ em .
al tto, identificar mecanismos de patogenia .~i~~;' o o Son dispositjvo; '~qUefiO tarnario que contienen material genetico, Sobre un ssf~~'rWt~,)Po poroso (vidrio, silicio) se crean micromatrices de sondas inmovilizadas posterior~:~fii;tg,,~~{hridan con acidos nucleicos libres.
o Hay dif~f~~tes'tipos: que .
'-;~.tS];~;chipsde fragmentos de cONA 1\1atrices de oligonucleotidos prefabricadas: Gel Pads, Microelectrolodos ::_ Sfntesis in situ: tecnlcas fotolitograflcas, tecnologfa inject '~~:(e~tlJci:iangenes que se expresan de forma cte para asegurarnos que las muestras son comparables. Se valera cualquier variaci6n respecto al control = expresi6n diferencial.
"c o (,'?! - Analisls Clfniques i Diagnostic de Laboratori \~.
\-\,Cl0~ I Centre d'Estudis ATP ©® 14 \N."\\)~\.(Cr~"k\C(.\ C~~ ~\.
Centre d'Estudis ATP ©® Anallsis Clfniques i Diagnostic de Laboratori FIBRINOLISIS Inhibidores de la fibri~ • PAI-1: inhibidor del tPA • Antiplasrnina: +TAF oQ inhibe la plasmina VALORACION DE LA HEMOSTASIA PRIMARIA a o o o o o uede indicar alteraciones en '·-·~·~~.3.J·vascular.
Inconvenientes: caracterfsticas cuali 0 cuanti de PQ 0 escasa reproducibiJidad (debido a que esta afectado de la piel, par el tipo de incision, etc.) Anallsls Cliniques i Diagnostic de Laboratori 16 ~.JA_-" por T' corporal, _ por las Centre d'Estudis ATP ©® Anallsls Clfniques i Diagnostic de Laboratori Centre d'Estudis ATP ©® Tema 6: Fisiologfa y Exploraci6n de la hemostasia C c.J-6~ ) CCf:::, C:SUL~ Funcionamiento plaquetario = HEMOSTASIA PRIMARIA: 4 etapas Adhesion al endotelio: cuando se produce una lesion vascular hay adhesion endotelio y emisi6n de pseud6podos.
11 Para la adhesion se precisan glicoprotefnas "\.£'N.J.l\~,.
61 <l~ l::IG..I3b) .F Activacion (j) e de las plaQueta ro~ ~ -a ~ Agregacion: es la union de plaquatas GP llb-llla que se une especfficamente lugar a puentes interplaquetarios.
EQrmacion <:=> Proceso que finalize con la transforrnaclon 1 ~~ '~ C~ -d~~€DL~~)~ en fibrina \i~:~~;f~'C:' -E-----:-----,J FL /fo.
(~6Iuble en plasma) IXa~:~a ~~~4=>~~ L de fibrin6geno IX f XIa~+ CO :D~ 0~<.~9)bS~'iPS<CeQt 6~\SPU~N COAGULACION, XIIa dando '~;§:E?~~E>\;( XI \je.
e., '-'.
'" t deltap¢o hemostatico enzimatko :-': entre sf. Es imprescindible la glic,cipF6.:t.~ff1a a fibrincgeno en presencia de (a2+~~tt~2elular (insoluble),;~.
r~ ~\>\a::b .' .
de plaquetas al XIII Xa------~ @~) t ~ 6' +---It'---l ••.••..
Fibrina estable Precalicrefna Factor XII Factor XI 11-R~'1.1 FactorlX~ Factor X Factor VII actor 11= Protrombina -: .:', Cofactores noenzima'ticos • Del sistema de ••De la coagulacion Quiminogeno o fisiol6gica 'l',S!;l,str?,to final de la coagulacion ".
:', Fibrinogeno ,": :..:, :~ .~..
Estabilizan la fibrin a Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori Factor VIII Factor XIII 15 Centre d'Estudis ATP ©® Analisls Cliniques i Diagnostic de Laboratori ~/3 r;:s , Metodos i~especfficos de fi/trado a elevado shear stress: PFA-100 a a a a a Centre d'l~tudiS AT? ©® t \ ebx'CA ct.
Cud, cU '..---0\ t)0fl -ISJ f~_ ~~-tV~c:.~(:)~ 'PW~.
Paso de sangre a traves de membrana con colageno + AOP 0 colageno + epinefrina Se mide el tiernpo.que tarda en obturarse la membrana (CoI/AOP 51-123 segundos y Col/Epi 65161 segundos) I\jl)~~&aff£l~\E:. ~ ~ ~OC~ fcN\iffi, Use: Oetecta disfunciones plaquetarias ~ f£ ~ \.l\):2..~ .lJ~~ , V.en:aja.s: no es sensible a heparina y elevada sensibilidad para detectar la 7Rt:djFvW Lirnitaciones: .
;C" ~ -c-:.
~n(~ ro~ nc:,~ i 1 ,:" '~ • [STUDIO:[ ;;:::~:::mi::::m= Se altera en plaquetopenia ~("~' ",'.'.' H1[ (& ~t~ I N~ Laspruebas de coagulaclon tienen unas caracterfsticas especiales ya que S&~Ji%R,g1~,-conun sistema cpjo, muy alejado de las condiciones fisiol6gicas y muy influenciadas por las proPi~'~i:'idEJSde 105 reactivos.
, Obtencion de la sg: , ,'~'1S~ E ' o Punci6n venosa 0 aspirado en contenedores que no activen el sistema''Be contacto (polipropileno, crista I sillconado) ifi" '.,., o Mezclar con citrate trisodico (9:1 ) I PJ::).J~ Cry-t I k:6) ~~~ Ci'ftJ.:lE.1 A~=) e o Transporte: 5-20 DC(a qOC se activa factor 7) t.~ o ' Centrifugacion y procesamiento e':l < zh, Si no eong~!as (~\~~m)?nas a -20DC0 6 meses a -70De) ")i:;i'f ." .",:~l" G..Sli A.m-e «::r~F. ~tti:N , ~ DETERM/~A~16N fi!!jf C;.
• • • • ' ; DEL TIE~rPO DE PROTRO~BINA; (o:r*~~~x ~ Afiadir 200 III tromboplastina calcica y r)I~dir{t~'e coaguladon, .:!,--", Interpreta U ~ ~ o o o ~ "'--" y'V.
I \.~ ~ "~1l "7' En general: f!J '~l~:~t+:.r" inhibidor de heparina.
resultados:,~:.
.
raz6n simple t p'~<iJ~nte/tcontrol 'K .
aa..t~ '\.
Depende de la eoncentraci69_~e"fit:>~~:~peno Q\j(\~~ No depende de 105faetor~~@.y IX Es sensible a la alteraclon.ebsla polimerizacion de la fibrina ," 'I.;;';~~-i'r~~ Las tromboplastinas comer!CiaL~~;;§~,)n !=locosensiblesa la presencia de heparina Expreslon de ' i!'1;g}~~~'tJ; cion:i";'" Depende de factore~(~!?;9mbl,Q~) , \\S>.\.~ . (\P") , Finalldad: Valoracion global de la vIa extrms<:9.,. CJ.\ ('W"~~ CS'!:) ) Fundamento: el plasma en presencia de troinbopl~~.1~,if1,~r(faetor tisular y fosfolfpidos) y CaCI2 coagula en un tiempo que depende de la's fact8t~,s.'1?fla vfa extrfnseea. '"ill.. -7 "X. ._)((.\ Procedirniento: ,:t>,"\:;~? Ineubar durante 2 minutos a 37DC,100IlLR.l~~;ri~':'~Poblema.
i. (Y)." . /V\ -'N '\ porque lIevan un ~~LD!'(}\e .
105 = 'j-'-' Valores de referencia: 0,8-1,2 (80-120%) ;<;·~·~;i;)·!.' \~.
1.0 2.0 2.0 - 4.0 1.8 - 3.3 1.3- 2.0 2.3 1.3- 1.8 1.0 t.15 \NQ.J_:CfS:.~')\&·(~(C \t.<rrkt\ Analisis Cliniques i Diagnostic de Laboratori ~~" ' 4 UG-RE e.l 17 ~~ "1\0 ~~~~, Centre d'Estudis ATP ©® Centre d'Estudis AT? ©® Analisis Cliniques i Diagnostic de Laboratori DE TIEMPO DE TROMBOPLASTlNA PARCIALACTIVADA TTPA)~ ) Finalidad: valoracion global de la via intrinseca~ C~ e ~\!C:~ Fundamento: el plasma incubado con cefalina activada, coagula al afiadir CaCI2• EI t que tarda depende de la actividad de 105 factores de la vfa intrfnseca.
DETERMINACION • B • • Cefalina Procedimiento: = fosfolfpidos (.C> ~ ~ activador de contacto -n.e\e ~c::::KJ'" CGe-.\I\OS'.ffi ><-OO~l2Of(..E Cli I\G\~., ~~~) X\'-\)I..-x ..:.1f-~~.
Interpretacion: o Depende 3Ql\.
l de factores XI, IX,@X, V YII (protrombina) y de los co'r1i(FRQ~~!9,\l~S del sistema de no relacionados can la coagulacion in vivo (factor XII, precal,!,9feiOa, qurnlnogeno) Depende de la concentracion de fibrinogeno '\}/ No depende del factor@ ,.
I:s sensible a la presencia de heparina 4I~! Muy sensible al anticoagulante hipico C\ Expresion de 105 resultados: En general: razon = t pacien~e/to~~ntrol (0,8-1,2).-6 ~~ Uso: en preoperatorios, en tratamientos COn hepar~l}p,. fl¥i~l",'!!~~ No sirve para el control de tratamiento con cumar;,friktY' r:~control de la fun cion hepatica.
ccntacto &f!j ~ 0 ~ 0 o o ~ I C l"l2:)N1tbp fEilrvfJ Incubar durante 2 minutos a 37°(, 100 ul, plasma problema·.;.,:,,_""<~V~~f)~i;; Afiadir 100 ul, de cefalina activada e incubar 3' a 37"C.,· "\i" Afiadir 100 ul, CaCI2 y medir el tiempo de coagulacion.
,/¥4~~';~::"", o o o / ../;~t~.
'T\~v,:~~~ ~ 0 o o if.'i~ Tiempo de Protrombina - ~.
(TP) Valera Procedimiento c~~ Dependede <R,£; JID. 9, 1.0., u I'~ e TeQ'(l~~,--",-, ·1 b~ Heparina &pr~ .NO·," ",....:::'~\~\,-2a VALORAClON _ ~~ )(.0 DELJriliil'&6GENo: Metodos de de~ii~in:.~Fi~6n: • V~lorasiq)l' funclonal: metoda coagulativo de Clauss: ellogaritmo del tlernpo de coagulaclon del 'p~i:lsmat;dU.8i-a.oes inversamente pr,-~po~i~~I,~llog?l~i;tm~ 1tla co}~c de ftbrlnogeno, cuando se . :,!anade trornbina en conc elevada.
C<..... ~c'2.\.
~ ~~~ • '4kflJoraci.dn inmunologiea: inmunoelectroforesis, inmunodifusi6n radial.
turbidlmetnca: incremento de dispersion optica (D.O.) al formarse el coagulo.
.
Determinar en coagul6metros autornatlcos, Expresion de 105 resultados: g/l ., • Valores de referencia: 2-4 g/l ValQ~rafl6n ~ro ,-p.
I PD,I,...-.p ITI DETERMINACION • •~ ~.....-J[i' m • DEL TIEMPO DE TROMBINA (TT): /)t {dAV,\" .., 'i"ff «, r f' Analisis Cliniques i Diagnostic de Laboratori .
,iLl ~e ~~~AR!Q® ~s:..~~ <'"\([2.
v-'\~\\nc.
.
Consiste en la adicion al plasma de trombina en baja concentraci6n Es sensible a la concentracion y calidad del flbrinogeno.
Sensible a la elevaclon de los PDF y dfmero D.
Muy sensible a la presencia de heparina.
.
~::.::~.
~:I~ :J:i~~~ ~~~~:~~:~~a proteasa de serpiente fibrin6geno.
Es sensible a la concentraci6n y calidad del fibrinogeno.
Sensible a la elevacion de los PDF y dfmero D.
No sensible a la presencia de heparina.
DET:RM~~~~~~: • 1-9· DETERMINACION que Iib~~~¥tB~ih2pePtido A del DE LA ACTIVIDAD DE LOS FACTORES DE COAGJ:;EI.6iJ: ~~~jF!~i':~:::;"~~~~?~' Factor II, VII, IX, X VIIf V, XI, Xll ESTUDIO 70'130 UjdL DE LA FIBRINOllSIS }·{;&~!i:J'>'". \f? Valoraci6n de activadores e inhibidorgs de:fcNib..rjnolisis: :~;,::..
~f~~':~:'\'" Utilizado para valorar plasmin6genoFr',I?A, ari~iplasmina y PAH Valoracion funcional: mediante stf~'tratos crornogentcos Valoraci6n inmunol6gica: ELISA (cdifW~ilT,),onocionales) , ;i Valoraci6n de J:)!ti~'~r.]J': 105 productos 'il1tqegradacion dela fibrina: dfmero D ~;\\.::~.,.,};: inmunologica;~Ua~trE3'tiva con Ac monoclonales semicuantitatiO~:'~C3glutinaci6n con latex. Metodos IfVv.Tj Principalmente Valoraclon Valoracion .:.~ ;, ", ',:::'> ;:-.;! .. , muy rapid os, de lectura inmediata .
.i, ··;;f·· Anallsis Cliniques i Diagnostic de Laboratori 19 Centre d'Estudis ATP ©® iGt, ".tj \ " I(\;'li;'.'.t'~'j J • J Analisls Clfniques i Diagnostic de Laboratori ATP ©® Centre d'Estudis INMUNOlOGIA Tema 14. Analisis inmunol6gico Clasificacion de las pruebas de laboratorio Inrnunologico: 1. Esenciales para diagnosis 0 control de la enfermedad.,.
2.
Dtiles'para 3.
De interes en investigad6n Tb pueden a) subclasificar clasificarse predecir complicaciones y diagnosis en cuantitativos Cuantitativos: de desordenes, '., .
0 evaluar resultc)'~:;~;' \~~~;,.; en el futuro y cualitativos son analisis generalmente bastante precis os. Se pueden autornatlzar sustancias de referencia internacionales para estandarlzar los re's'~Jf?:g9.2\~·· 'u, b) y se dispone Cllalitatjvos; producen tecnlca considerable respuestas del tipo normal/anormal y la interpretacion AnQis ;~:=a~~:~~idad (AutoAc) CY Inmunoqufmica (lg) de los resultados AN~ et . -cc-sr Pued~/l irnplicar una pericia 0 +]: • puede ser subjetiva.
(1)nn:unid~j~~:elular/ .:lb OCCWae:.1V· @nrn~npgenetica Citocinas (HLA) .~~~~;Q;~;~~~;::i::uer20si~;'!'F~ ~o~o::o 4 metcdos: Inmunofluorescencia (IF), radioinmunoensayq;(RIA),'inmnoensayo "i , ! F ELISA, electroforesis L;;<,~~~~~.' .~.
IF: es I.atecnlca menos sensible y depende de l~!ffiti~~r.etaci6n subjetiva expenmentado.
{-->'"_''' ",' Ej. de enfermedades: lupus, tiroiditis, cirr~"~J~,pili~.M~:~~~aria,etc.
INMU.
NonufNiiCA - X_.
.
/;::.:;i'!;":.}'.::.:!...'-'·Q.·'·.\';~,.r,;:~Q.M "'''.~:...
, ,--,II ~C .
~o(em?~Z ~"('l(:Jf'(\OS zr~- ~~Q()1~ r:» I J de Ig -:- rss:» "-<~~frt\O\c..oYcs Gi0 u ~ , o Es esencial enpadentes con i~fess!o s nu~~erosas y severas ("f'€ C U~""""T"E-S2 ) 0 Tb en pacientes con mieloma 0 '~tr~'~~dades mleloproliferatlvas -Jl)~~f\Gcn\J.J ..< Son utiles en e,l dlagncstico difere l~L?e'\lJpergammaglobulinemias Cf'l\~) a) Determinacion is ~ p~r un observa~or Er ."1 Ac .
~Se hace p.o.reef. elom~.E •.l.
~:l;~h~·~.~.
V\~G<s? .~~'S'o.l<;:~S;?"U(;'~ o ~ao.i::50 .
- ~~fa'f1 A- \fO.~ r('f~K)~~-- \~ ~ b) Sistep1a ~eJ compleme'1~~:=S o Lo mas util es medir,.(j y"eif'.· ~~s.
k ).
_'~:;d?:t-~ ~ Cl2e{'{\) \ " ~~ ~ 'I ~ \.'2.
.
J) I ~f.J c. (I 'SQ \;~ , e9- 8:l'B~ y.n , ~'\I ~ .
~~ • Raramente se mideii"()tt~_s;,componentes excepto en sospecha de enfermedades geneticas 0 ensayos funcionales anorrnales.
.. ;.
Ic ' , ~ EI ~1inhibidor s~j1!We~i hay sospecha'd~,~ngioeclelT1~ hereditari{ m\--\ 0 OJJjl(\€U o Se mide la CH5.o"qLiernlde la capacidad funcional a partir de la capacidad citolft ca .
.
(Qj \~ "''''' -"'-r ~ • l(--t\ \I'U. ~"\ \tC.'.~ ~ on).
!GC""iO . ~ 0("2 n:::::, ('{pI~ m:>~~c\ ~oG.h~ ..
C3 7; '," Factor B Ejemplos (c4) cAe:" \-c.."5- fiJ)~O c.1 ed8u.q e~ ,!.
T- + ; ,p.' N ,!.
t N Lupus (LES), Vasculitis +,!.
~ Bacterias Gram nsgativas, algunos cases de LE5 N N t t Enf autoinmune C3 NeF Angioedema hereditario Inflamaciones agudas y cr6nicas ,!.
Jtiet-dlm~ es d~ cs:> ·-\-m'= p~ Anallsls CHniques i Diagnostic de Laboratori -~.
_ ()2f\U~~ '-1~ ~ ~ E'xCQ/d-) ~~0~S-.
r-.
» ~~iG mcle ((n!ou...~"t:f)) Centre d'Estudis ATP ©® 20 /2c'(,~, (~~: /\a~ (~ 6vQ/.e ~) (J 2~ C~) Centre d'Estudis ATP ©® Analisls Clfniques i Diagnostic de Laboratori ( 6u..~"S .
c) DetecdOn de antjcueroos I 1\1\.i t\J fr.U.O "2 l:::N o La presencia de Ac circulantes indica contacto previo can Ag ~ '.
o El aumento de Ac (normalmente x4) debe detectarse en 2 muestras de serum separadas 2 semanas para diagnostica infecclon aguda.
.
, o La presencia de IgM especffica indica lnfeccion primaria -"r:::>~G- -r.> i'<1~~~) o Deteccion par ELISA y se expresan en u.i, (unidades internacio'na1-€s) ( 0 unidades arbit,f;~rias) if .:~~h~,.:.>:~:".
La deteccion C 'S;-D~Q.'~r:Sy:::J de Ac tb se usa para evaluar posibles inmunodeficiencias.
"'S,r.y) ~ ~j: I.a'presencia .de Ac anti~n.eu~oco~o e:tan presente individuos con mmunodeflClenCla pnmana.<:- ci ?N\\\~~) en la mayorfa de adulto~;:~gt8~s,~ r: ~ E(.
~quello~ Tb se pueden usar Ac vfricos -'7~Z3if~'~;f+'ir Tb Ac del tetanos, difteria 0 polio si el individuo si el individuo ha estado inrnJhtf~d6 .
"'ll~J;l' INMUNOALERGIAS rnetodos: RIST (radioinmunosorbent RIST: detecta Ig E totales (ng) RAST: detecta Ig espedficas Cng) test) y RAST (radioallergosorben~tW~t).
2 'i.ir.~~ ;~j~~~rj}F Tema 14. In'munofenotipado ~'T~,~' ~ c.t::t-{ Tipos de pruebas: A) Cuantificaci6n de los diferentes Importante en: ~ tipos de celulq,~ '-., EVALUACION 2 DE LOS L1NFOCITOS o o , Estudio de lnrnunodeflde Ciertas patologfas linfoprp Pronostico del SIDA,Q,\([H, antiVIH ., Tecnica mas usada: citometrfa ~l/' ~, det{; as eso de la enfermedad ~~w" a terapia con ., e~mite cuantificar en fx de los marcadores "'~ laciohes linfocitarias y las cuantifica T: C02, CD3,lc-n-4": i=!.~C-D-'7177, B: GD19.0020, C NK: CD2, GDt6 ,(Fe y respuestas de mb (CDs» -g~-::>~ _<, (CALLA) M0: CO~tc, G014 ,;.~' .
Diferendacjo:' Adhesfo ..HOm La proporci6n CD4/C[)§~k.,~? '~{[,5 ''',\3'' :~.£:::.:::;.....
_~ {mieIoIde). CD45RA (naive), CD45RO (memoria) ;:G054 (ICAM--1).LFA..1 r Vc. ~\e..GCYI) <:::>~ Artriti~ielHii~:~hide CAR) irrosigiB'iliar: primaria es: -';;,~hr:r Psoriasis -; ~[n1!,r;'0~~'de sezaryCn\..)c~ D"~fk!ghcia de ••••.
Zap 70 '~~~~i~:;-~':';'~a '? • .d': ~3;9;._ c!} ~; 13) ~~~%ypjr:\'itro sus funciones individuales (pruebas funcionales)-offi S61o'"'Ci~ben solicitarse si se sospecha inmunidad celular anormaJ.
Se utilizan Ag para ver si TCR correcto, Ac monoclonales contra CD3, etc.
Analisls Cliniques i Diagnostic de Laboratori 21 s:::N Centre d'Estudis ATP ©® Anslisls C1fniques i Diagnostic de Laboratori INMUNOGENETICA Centre d'Estudis ATP ©® Y HLA Estudia: • Compatibilidad genetica entre donantes y receptores , progenitores hernatopoyeticos f§1. La susceptibilidad genetica asociada a HLA, • Microlinfocitosis mediada j).\~j..~tJ'1" muchos tipos de HLA asociados '\:J:;:};\~j;Qr(\~~-:s.
HlA RIESG.O 'B27" 'DR2 87.4 Hiperplasia adrenal congenita O:ermalliis herpetifotme 841 15.4 15.4 Hemocromatosi 13.7 13.3 EscYeO;lsls mUltiple TlroidlUs subaguda CWS OR3 Psoriasis Malallia cellaca Het'J1QCfOmatosi Idkipf:itica AS OR4 DiabetiS Mellitus ' MalalUa de Beh9,cl Malaltia dtAddi$On B5 Lupus eiitromatos 49 Anemia pemJci~ 1Q.8 '-,"'""--~tn~niagravis Ilia de H~kin 604 etisMe11itus s.a RIESGO 0.8 5.4 4.7 DR3 DR3· OR3 A1 OR2 ,"Diabetis'Memtus 8.2 HLA OR4 DR2 ;~ifti~'~~ Grnve~ ~ l~ I) DR3 DR5· B14 Idiopanca Artnl1s Reumetoldea 6.3 OR3 C p~ H-LD== S~H a enfermedades Espondilitis Anquilcsant NaTcolepsia OR3 935 I~ '«-":\\~~~y/ -- f!!1iIHan detectado ' , ~ ~~~~;'iJfEOTo en DNA: PCR (PCR-SSO, PCR~?s;R)i secuenclacion cfclica, etc.
I\ib ' por el sistema del comPlem;to Para hacer el tipaje de HLA utiliza tecnicas basadas de organos solidos y de en trasplante 4.2 4.1 3;7 3.3 2.5 1.4 0.2 pat~~og;:;;;::~~~:~~a:,;~~ ~~:i~:~:7 ~~~~~~~6u~~I~\f;l~t&it~s -=tJ>.~ IOI~c~':~~~s Oebido ~ mutacio.n~~ Produce.
2.
0 susceptibilidad del~ccio~es en a l~feCCl:;':~, de las regiones. ctes de las Ig.
';"ic:"-~~,:;7-\) ~\ Sfndrome ~ Debido a mutaciones dellig<!.h~Oa£;tD40 Produce: deficiente activaci6h:.i9x~)infocitos ~J,D<.CL.® Hiper IgM ligadci~!~~:~~;r Defecto de expresi6~ Debido a rnutacioneso Produce: alteraciont8e "~.~ /.' 5.
f2? ~:~;~~ne~~o~:~~~~~~:~:~t"~£,;~?ilt~;~i~ 7i~7;~:~~~mun)'~d 1iitQ,3.
4.
_ ~.
,~~;:~_<~: c. vec~ B dependiente de linfocitos Th y rnacrofagos.
cS;.t~'C:S"-r:J Ciel'ecciones en ~os genes que codifican la inmunidad celular ~xpresi6~'def'ectuosa 7.
Deficlencia ' CD3, ZAP 70.
tipo Epstein-Barr ~/ 6.
, para protefnas ' ;:-::·jt:;p' Sfndrome lifl,fq'~~~iif~~ativo ligado al CR X: Debido a mtJ.~~ci6J1ien protefnas adaptadoras (SAP) Produce monf~[a2ion incontrolada de linfocitos en infecciones . ".;': .
de MHC clase II: produce Iinfocitos T defectuosos ' de TAP: produce Analisls Clfniques i Diagnostic de Laboratori menos linfocitos (08+.
22 Centre d'Estudis ATP ©® Centre d'Estudis AT? ©® Analisis Cifniques i Diagnostic de Laboratori A-ev..
Sfn;~mDe:f~7~~~:sn::~~CJii~~i:i~:Su;anas ~ ~~C)~.
Pruebas de laboratorio: 'folfculos y centros germinales ausentes Infecciones recurrentes: bacterianas, extracelulares (con pus) 0 reducidos: 19 sericas reducidas.
Lu~~S Defidendas en 105 Iinfocitos T Pruebas de laboratorio: celulas T reducidas. p.espuesta a Ac especfficos resJ.-uc.!da<"i~i.bLferacic5n anormal de linfocitos T estimulados in vitro con mitogenos.-D~.
",' ..\()d~~ f\I~"'iS--0.
Infecciones recurrentes: vfricas (ej: virus EB)yotros microorganismos ir,\,"tra (micobacterias, Pneumocistis carinii) Defjciencias en el corrp\em ~ {\"f~'t~r1rt dc y macr6fago~S'CI~· Pruebas de laboratorio: variables seglin la especie deficiente Infecciones recurrentes: variables, flingicas, bacterianas (con o "C\"'I""C, r'1': I t..t.r ~~ N!~\K,"" \~ I \'''I .
.
..-.v~.
• • '\/ .
sir:;l?us) ,~~;" 'l;" .
f,\::;';;;;~'l;::,.
Caso clfnico: • 0 Nlfio 6 meses de edad.
.i,~:;.:";;~~:)f Fiebre alta (38°C), tos persistente y dolor cabeza. r;!:2sfhfo~::'~j?:<(je meningitis. Amigdalas .
r pequeiias.
Le dan tto contra la gripe pero no remite a pulmonar, cuenta leucocitaria y Le lIevan a urgencias y de solicitan las pruebas: rp2.
cultivos de sg.
Radiograffa: indica neumonfa Leucocitos: 15.500f!.tL(v.n.12000) [72%ne , 20%linfocitos y 7%monocitos] Cultivo de sg: negative> r, s'", Se inicia tto con antibiotico de ampli'O,-es~~~fgt';1~'pero no remite la fiebre.
A los 4 dfas empeora y se Ie hace laxado,~1bnquial y observacic5n rnlcroscoplca, " ; 'I .- JW • . Se diagnostica Pneumocystis cflf;,LOJi Se ernpieza el tto con Bactriwi?-;:;tfametoxazol y trimetroprirn) y paciente mejora espectacularmente en 24h y ~:jQ,s':;J;?J)cos dfas recibe el alta y continua el tto vfa oral en casa.
~~·k. ~:<t~~~J'7 • • Se recomienda estudio inmuril~i~gi~o:cuantificaci6n de lgs, protefnas del sistema del complemeto y subpoblaslones de Iinfocitos.
Se descarta Inmunode~s)€~cLa severa y sfndrome de DiGeorge y VIH(ttO!:.re ~'tJ~ .\}\\\) ~-te"&~>~\ (ro\\i \\Cl~m,-~ ~(.Q\ ","'::~;(~~f"." • •.
• • AI repasar ante's.;gg!=nterfamiliares la madre menciona que un hermano suyo rnurio de enfermedad fT!i~H~tt~~,~ durante el primer afio de vida Sospechan ir1'f1"illho [eficiencia Iigada a CR X (Sfndrome de HiperlgM debida a rnutaclon CD40L)) t'~ Q.lCL uiVi=T. tOhJ~N \Jt\Jj=.~ , " Estudiallrl'g~~", !h IgM muy altas e IgG e IgA bajas. it£.i..'O.\~~ ~i \J.,'1(.f) f\\S~ pa$.LeDtJtr;r~~B;i~senta centros germinales en tx linfatico y no produce Ac correctamente \I~icuna tet-aff'bs y difteria.
.
c.'Cde.
~.j;}~ffi\(\i"S~'.:r z.
~B;Qt\"c~ 6.
\eON'S E{)% : tER~~ J pI DNIE::; 1"0.cs 3-4 una en gen .
~ b.. €C.id frente a ~meres .
k .l' /1'5~1alEEk '1CB. .
Analisis C1fniquesi Diagnostic de Laboratori 23 Centre d'Estudis ATP©® C::02>T -0 T I rJ COLI.
COO + T,"t T Tc l-e..ucern\.eS " cmeers seQO'Dc.{oci PJ§¥f\ ~ ct\S rn~fCtCIl\..C c:Ie-'501\9 te5 ~ de "'CCX\-et: J,J....U'\"\ ,(\ -\eP\t:\a..LLO l~t'o frv'nmi-s -se~ p~ -.e.vV\.fuc·L'tcc.
"'\sk'-V"''\ ,'-'= 1<...Uf'\ d(G- ,~~ I'-Jb de CO\..Ot rv".r.. C\ ~b L.'\ ~ \ poQUe .'1.0'=+ mCIIQ\...e\f\ '\.--e.r-. -v ~'OI\.S' ~ (RCoLU) Ac o...VY\O pnerN" ', <5, O{\l\\::] COIn \0:: Qu.V\o.~, Q',,)()C.l~: + 1-1,- .>.
v -eo l::;c::u...L"t ..Q.o (\.O'('0..G-\ -c':.\. c:!<;:::p\&.
de ~ ~ de: COg CP9fCN- \ C.LtoMct\A.c....
v'€U.\e ~ \e.s c::e..\.
flu. "e ~cm\eS lO Let.., LLLla- 1..0 lCl ~or .iIi'1\' (-0 ci.:.,\S.
'3' / ..
(.){O ..tl~OO' c.1dU> 1 ~.
A f'f'-~~' ffitd::oo:::te.s --e...u.
~ L lot- ~f\"\Q(Je - 'lY\pD !tC:.u.L1" PttA;.
~euf\CD..., re:3?~ 'La.lJL(l,t:), AC\"\..U-,,, 0 V\.Ql~ S d:e.
LL1\.U.Xt.C, ~Vf\.~S.J~~, '/... l CA te.lL\9BOct.cr CbS'eC\...
~u..\..Q \Q.
<0 09f'(",(9 :C(,(\N"\U'\Oge~c...Q e &$I ~ q-u.~""tD \::;}.
\'f\04O\.AO CO\S q~ " EQ'{'\ "'t':\ Qef' -eshrH, 1.
, ~'-'-> HLA.
o::J\.O- ec, :s. \.es ~C~'Q..ue5' -e'J..:cp-te.
c:u..u:-orof\\u.rw~, a~'\cL~ CCI\.L\..C.~,Jt· -b- ~O Ic\LA_ a.Q,'Qp Oe.\ \C\ ~;) E£\u\\.JL\.
N:..\rC:OJLeP ~~.
\:i\...A. .
L \(.
~ :f IL'Ci r¥-tiv{! ~ 09..~ -es ~I.!l Analisls Clfniques i Diagnostic de Laboratori Centre d'Estudis ATP ©® MICROBIOLOGIA Tema 16. Microbiota del hombre Microorganismos pueden presentar diferentes asociaciones con el hospedador: a) Mutualismo: beneficio recfproco.
b) Comensalismo: para refugio y alimento.
c) Parasitismo: perjuicio del hospedador .\:'1.':_.
,':' Microbiota indfgena: Poblacion de microorganismos :'~\:::::~'!;\:;f~:,"/ que habita de forma normalla piel y mucosas de las personas sanas.
,; ; '~'"'" ';" ,',; Depende de: Edad Dieta Estado hormonal .,;; ,.-. '.!: ;~:~':'~:")::~' Estado de salud. ; Medkacion Higiene personal A' /~;.~:;'.
~::.:~.
La colonizacion puede ser transitoria 0 permanente Biota normal puede causar patologfa: a) Si accede a lugares no habituales b) Si se altera el balance de microorganismo c) Si se producen cambios en el S.I. individuo /;t~~~~ -;~ La biota normal tiene efectos beneficiosos: ci:,:f'''',''<~~!-;! _ 1.
Protege de la colonizadon de posibles pat9:g~rio'sJti9terferencia bacteriana) 2. Ayudan a la sfntesis de Vit Ky vits del grup6:~g"tr::l:"J -' _ 3. Intervienen en la degradaclon de carbohjar?,to~:fJbrosos (rescate col6nicode nutrientes) 4. Participacion en elreciclaje de ure~;y_,~al~'$n~)'m~res. , 5. Estirnulacion basal del 5.1.
/7 .
,~"''l ' iS~:'" i? Microbiota pat6gena: ;;~~'" Mycobacterium tuberculosi~{i)J~6;erculo~i~ Mycobacterium leprae: lepra", Neisseria gonorrhoeae: gonon Francisella tularensis: tulareni'J Virus de la rabia Pasos para el establec;~~f~'f;t}:)l'deuna enfermedad: 1.
Encuentro: ,¢liiilI:r;porganismo puede ser exogeno 0 endogene 2.
Ingreso (irihlll~:%I6'~, via digestiva) 0 penetracion (picaduras, cortes. Trasplantes) 3. Disemin~:~6n:\a!~onas contiguas 0 mas alejadas dellugar de ingreso (diseminadas) 4. Muittpli~'~~10rf 5. Q~fio: lesiones mecanicas, muerte celular, alteraciones del organismo.
Eiihp,sp~d'~dor intenta dar una respuesta inmune y se produce inflarnacion 6. Resultado: final mente el agente 0 el huesped gana la partida Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori 24 Centre d'Estudis ATP ©® Analisls Cliniques i Diagnostic de Laboratori Interpretacion de 105 Centre d'Estudis ATP ©® analisis microbiologicos EIsimple aislamiento de un microorganismo no indica que sea responsable de una infecci6n.
la biota de cada zona del organismo para poder interpretar el ana lisis.
4ES preciso conocer ~zonas esteriles: Cerebro y SNC Sg, fluidos internos, txs y sistemas de 6rganos (hfgado, coraz6n, ... ) Ofdo medio e interne Tracto respiratorio\j:e~ in jt:n ~ ) o Rifiones, ureteres y vejiga o Utero, endometrio, trompas de Falopio, cervix o o o ~ PIEL Biota indigena • Staphylococcus coagulasanegativa: • Corinebacterias sapr6fitas • Micrococcus • • • • Staphylococcus aureus Estreptococcus .
Propionobacterium S. epidermidis acne Levaduras lipoffllcas de 105 generos Malassezia y Ca; Biota pat6gena aureus : foliculitis, forlinculos,j!i~;;;,,,,,;..f1esde quemaduras Estreptococcus : impetigo, celulitis, fasciti \., e~crO'"san1e •• . Propionobacterium acne: acne, blefaritis m Malassezia furfur: Pitriasis versicolor (tifi"~~,~_.,,,co or) " Candida albicans: infecciones ufias,.;t1i'iad~i~1~;f •• Clostridium perfringens: gar1grel!{gasSLQsa';~'{' ?.; B Pseudomonas aeruginosa: infec:croFi~'~ ~maduras •• Mycrosporum, Trichophyton, EglqJ~r '",' ton (bongos filamentosos): tiiias,onicomicosis Virus Herpes simplex: herpe.~~.9bial ; • Virus del papiloma humano7'"c;;it",gg~ • Staphylococcus • ,J ••• :J'l:.)., i!J"~", 1::,"'" ~~~~/ 01OS: Biota indfgena • ;, ,_ coagDla .rr~gativa: S. epidermidis if! Staphylococcus • Corinebacterias • HaemophiJus<;¥/ t, /~~ft,; "·:.;~~1=:1::•..." • Biota pat6gena • Staphylq~{o~"..
reus .• Str,$p.Jo6~~~'y~JPyogenesy S. pneumoniae } conjuntivitis, queratlnltis N,fisseria g'b'riorrhoeae :,~ :~ ~t~"" F • A~::e.nQ-YIr.6sJ herpes: conjuntlvitls ·'';;':~;.;d·.rr: Analisls Clfniques i Diagnostic de Laboratori 25 Centre d'Estudis ATP ©® Centre d'Estudis ATP ©® Analisis Cliniques i Diagnostic de Laboratori 0100 Biota indigena •• " •• •• •• del Ofdo externo coagulasa negativa Corinebasterias Pseudomonas sp.
Streptococcus pneumoniae Enterobacterias Staphylococcus Biota patogena II II • • Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus Streptococcus pneumoniae HaemophiJus influenzae APARATO Orofaringe/Nasofaringe •• Estreptococos •• •• •• 0 medias } Otitis medias L E I , ! aureus grupo viridans .•..
::>..,.i· '?~~l~\,>",~ Neiserias comensales Bacterias aerobias: Fusobacterium, A§:ting,~Y'ces, Veillonella En portadores tb: '/:"" ~B.0'§~~ o Streptococcus pyogen~f: s...
pneufnbniae : o o o » y S. pyogenes Otitis externas RESPIRATORIO Biota indfgena » Fosas nasales •• Staphylococcus » } ~~~sh:ji~c~~~~~;i~~~i~~~~;%1~!;~;~~:;,/F HaemophiJus influgn~'cl'e i' MoraxeJJa catarr'Ni{li~j';h' Enterobacterias ~1,;~~,:":;ft.:~.~y Senos nasales, Ia ringe, triiquea y ~;~il'~uios: esteriles '.~" ::""::'-'1:1 Biota pat6gena ';~:"c,... , EO Infecciones sinusah;§f;St}Eipt~coccus pneumoniae, Staphylococcus aureus, HaemophiJus influenzae •• Faringitis: Strept()t6gC"llS pyogenes e Infecciones ge~~5?le~:~d~ TRI: S. pneumoniae, s. aureus, Enterobacterias (Klebsiella), MycobacteriuIT]tu6e~Eulosis, hongos (Histoplasma, Coccidioides, Blastomyces) •• Virus: T'\';-'>.
o Rinov;{ifi/A~iJhovirus, Parainfluenzae: sinusitis, rinitis, faringitis, bronquitis o Viru.¥~pstf·ig~Barr (VEB) : mononucleosis infecciosa :~;,:J '::-:~:.':;: ."i~ ",.
I :.!.- Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori 26 Centre d'Estudis ATP©® Centre d'Estudis ATP ©® Analisis Cliniques i Diagnostic de Laboratori TRACTO GASTROINTESTINAL Biota indfgena }- Boca •• Lengua: Streptococcus salivarius, S. sanguis, S. mutans e Placa dental: Espiroquetas moviles, bacilos moviles, Actimonyces, Bacteroides Huecos encfas: anaerobios estrktos (10 ufc/mL) •• Saliva (108 ufc/mL) •• Mucosa bucal: anaerobios, Streptococcus j3-hemolfticos (no A)/'''''' 12 Iil .;'~'~':;"-'-.
» Esofago: biota de la saliva y secreciones nasales » Estornago [pH 1,8-2,5 (103 6' . ":~'{~::~"' __ '" :'t,"';C'Kb-, ufc/mL)]: Streptococcus, Staphylococcus, Lactosg.<.=~us,La~;J~~cjJIUS .
.
}- lntestlno delgado (103 ufc/rnt.): anaerobios (Peptostreptococcus, Lactobacillus, Levaduras, Enterobacterias , ·sZ;\;.0::ff~~~~5t;;t;'- Prevotelld~~~tttjEnterococos, '\,.,:," j;; » Intestino grueso (lO"-10 ufc/gheces, 200 especies diferentes): Bacterqjges, Bificobacterium, Eubacterium, Lactobacillus, Coliformes, Streptococcus, Enterococcus, Cci"jlfdida ' 12 Biota pat6gena }- Estornago : Helycobacter pylori (gastritis, ulcera) Intestino delgado: .
,-t;;,,;.. ." Enteritis (.d!arreas):~.9:mone% CE!!]I2X~,.b~~ffiBl~2" » enterocoiltlcc, TRACTO Clostridium perjrmgens.
Co l' .. I~ F[f"<J--<'''t-,~ GENITOURINARIO Biota indfgena •• Uretra •• •• •• icile, Shigella, Vibrio, Yersinia _.',_ distal ' ),"~-':~:2~ Enterobacterias principalmenti,~>c.he:f[~fi~~koli Staphylococcus coagulasa nega a.<" Corinebacterias y,--,~.
7-0~ "c;, ()n~ <, •• Estreptococos a. y f3-hemol~i?s •• Vagina ",&~i.i~" o lnfancia: mixta, lnespedf@}.:~Bf?~a Difteroides, Micrococcus, Staphylococcus o Pubertad: Lactobacillus aC{~f?J?lf![r~s, , negativa, Enterococcus, lev;:;'GfHras o Embarazo: incrernente.de Lactobacillus o Post-menopausia: i"'~'~tn~o Lactobacillus e Vejiga urinaria, riiiones,cto Iti(.;:~ Biota patogena coagulasa genital superior son esteriles J --D,~~ffi~~ • s::::n \:"n~CJL,..'Y'\~ Q~ ~~S;: •• Neisseria g:~;~hoeae: uretritis, infecciones tracto genital superior •• Chlamydfattiw,if)'matis: uretritis, infecciones tracto genital superior •• EnterplY" t~ris (st E. coli), Enterococcus: infecciones del tracto urinario ~ •• J!;~pd'W . allidum: sffilis,infecclon sisternica ' - ••,,{Virus: h"erpes simplex y papiloma ••J};(1~ardn~!e1/avagina/is, Candida albicans: infecciories vaginales ~.
\··~~t~;~~j;?;~~P Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori 27 Centre d'Estudis ATP ©® Anallsis Clfriiques i Diagnosticde Laboratori Centre d'Estudis ATP ©® Tema 17. Toma de muestra Caracterfsticas de un laboratorio de Micro Clfnica (MC) • Gran diversidad de muestras c1fnicas ., Gran diversidad de metcdos analfticos ;,-'.'-' Metodologfa: a) Anallsis Observacion al microscopio ~ Aislamiento en cultivo ~ ..3· Deteccion de anticuerpos, antfgenos b) Identificacion'~ 1.
2.
r:::K"tee::tb ,I" ('e, , 0 -s:)\rx::rr:~ acidos nucleicos La,:~o;::~:::;~~ed: ~:::::::::::::,n:~:~:::~::::e,u'tado,decali~i~;?i:~ndUyente, cuandose realice el analisis.'" Preanalfticai;;.' o Trabajar con normas de seguridad basica (todas las muestras .
sanitario cualificado (enfermeras, medicos sorf~otencialmente infecciosas).
.~q,,tarr:1:.~S:~Qticos) o Personal o Manual detoma de muestra a disposicion del per~gQpia~¥t~R;iatorio - Can info dellaboratorio de MCespecffica P~~??2'~$l.9)~,~[dad Info sobre 105 anallsis que realiza ellaboratorip,r",.";f/;,r Metodos de recogida de muestras.';;;:z:qg:Recipientes necesarios Coste de las pruebas o Disponer de informacion clfnica del paciep;e (~1';f6ndamental En la solicitud deben aparecer los datos 6lf6iEQs del paciente ,,~:i::-:'.;,_.
<a,»: Enfermedades debase /', .. c",,[ ~~~/ J.,('.~,r:.~ ","~.::.,~: ...-.}'i- para el diagnostko) -p Factores predisponente~ciedrifeccfOn Datos ePidemioI6gico~;e~'YR~~~~,}(6rofesi6n, viajes, animales, etc.) Medicaci6n: antibi6tic&i;iinmuri'¢'supresores, cltostaticos, corticoides Caracterfsticas del p;i6,s~::;()patol6gico en estudio: diagnostico presuntivo, .microorganismo sosp.¢'a;:g~g" .
.
.~ ~~ Nombre del medico Y';t~~:~tpno(para contacto " •• J rEiemolos.l Infecci6n urinaria Diarrea Granuloma subcutaneo ,t":'\i y consultas) i sondada Jt: , P.~"fs.o8a " Paciente anciano en i:P9,?operatorio y 15 dfas con ,;;\(';~~~ a,ntibi6ticos y omeprazol c ""'irf~ ;:Tiene pecera en casa /;::'!;it:;" Puede haber infecci6n polimicrobiana Puede tener Clostridium difficiJe (detectar toxin a en heces) Pensar en Mycobacterium marinum G ,1') (Hacertinci6n Ziehl-Neeisen y cultivo)'--"" ':y Prepara~i6r:),pr'~tj'a del paciente: reducir al maximo la contaminaci6n por la biota normal ,':'{~:;;,>" o o 0 amb.ient~l/_:: EJ:'Lavado'~c/antisepsia de la piel, salida de acompafiantes de la habitaclon, etc.
Muestras representativas -' 0, "Tomar la rnuestra en la zona mas profunda -,' Que sea representativa del tejido infectado, preferentemente del margen activo de la lesion.
Tomar la muestra (si es posible) antes del tratamiento con antiblotlcos Anallsls Clfniquesi Diagnosticde Laboratori 28 Centre d'Estudis ATP ©® Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori o Centre d'Estudis ATP ©® Cantidad de muestra adecuada Hay una relacion directa entre la cantidad de muestra recogida y la probabilidad de aislamiento del patogeno o Son mejores las muestras obtenidas por punci6n (sg, LCR) que las obtenidas con escobillon esteril (hisopo) o Generalmente es suficiente una muestra excepto sg (3 rnuestras/zab).
<',\;<i:; - o Recipiente • .---b • d adecuado u2.ijG')fU'7-ul'V),J~~ffl~1}:'0-- :\:':'t:/- ,,- Frascos 0 tubos para material fluido: esteriles y cierre hermetico Escobillones = hisopos: Mango: plastlco, metal fino y flexible 0 madera - Torrunda: dacron (PET) a rayon, alginato cakico, algodon ~'l u Funda: contiene • o Jeringuillas: Transporte media de trans porte (Ej: medio Stuart a Ami~~J?ara bacterias) esteriles y deseehables ~ ~'r rapido _ ~~~.
)",,, Una vez tomada la rnuestra ~ transporte in~~di~to @:;Jab~!iL(8t,!Ppara su analisis Si no es posible ytilizar un medio de transporte par? m$f~~})er;;:Jbs microorganismos evitar el sobrecrecimiento de la biota normal.
.-_ ';"f;'~l?"'- ~ Ejemplos - / , viables y Medio de transporte Stuart ery-Blair v~\ Hanks =Clucosa =Antibi 'ticos: Vaneomicina, o Conservacion adeq!~8a BACTERIAS, ,<$, •• - - __~oyJ'"~ ~ .v~'::- "'",!ifr;~( Tram?;po'rf~;:;<2h:conservar T:.~~J'~wgl> zb y maximo ~;~.".~?~ ~.
colistina, anfotericina B mE:T8. ~ L::,~~ r-:--:-~".·:z.-4-4-.--~-~----,,::::--_U_:_N_:S- a T' ambiente de 24h: conservar en nevera a 4°C, maximo 24h.
1'" H9Y';mic~6~Fg~fnismos sensibles al frfo: f';l;eisseria f1j'~'ningitidis, N. gonorrhoeae Haemophilus $1]}gelJa sp;; Bacterias anaerobias influenzae --"1~~~~t::r.:/ HONGOS: Transporte - Transporte Analisis Clfniques i Diagnostic czh: conservar a TOambiente > zh: conservar en nevera a 4°(, maximo 24h.
de Laboratori 29 Centre d'Estudis ATP ©® Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori Centre d'Estudis ATP ©® VIRUS - Transporte <24h: conservar en nevera a 4°C, maximo 24h. Excepto sangre Si la muestra corre peligro de secarse utilizar medio Hanks - Transporte > 24h: congelar a -80°C(excepto algunos virus) Recepcion de muestras: Aceptaci6n: o Identificacion correcta o Condiciones adecuadas de transporte y conservacion Una vez aceptada: Hacer observacicn rnacroscopica: heces, orina, LCR,esputo , ',.' , Hacer observaclon rnlcroscopica: permite determinar el grado de C~ht~ii{jn'~cion Anotar 10 observado ". /' , Rechazo: o Escobillones secos a Orina y esputos contaminados o Heces formes para enteritis ."","<~~i)~r;:tI~';"" : ~~~~i~i:~j~~aasn:~~~~~:;al a Muestras deficientemente identificadas (Pedir m..i~~i§:fr;J,!J~~tras) Si no es posible analizarlas indicando la incidencia i~~:\:r.,·'ilf~ Muestras derramadas (Pedir nuevas muestras) Ai~:;,,~"::;-:~f,~?' Si no es posible: pasar a recipiente esteril y an.f,UI~~tnp~icandola incidencia Transporte/conservaclon inadecuados (Pe~;lJy,:n-ue'2.:aJ'nuestras) Si no es posible: analizar pero 105 resultad,d5'~3'~,Nlos con mucha precaucion Muestras repetidas (No procesar, guard<'lr)~p:''''':2' o a o MUESTRA DE ORINA' transportados \1:1~~ i~s /'; ffi~ .
\c::s:s.
Muestra convencional = reco ida or mif''i'~ ~tanea (10-20 mL)-D'reC.~ Frasco esteril, con tapon de rosca, n~;, dia':, ,,~t~nsporte ~~ Instrucciones al paciente:' "");,,' F Lavado de los genitales ex{e!.f{R~~~~n agua y jab6n mL.
:~i!~:~:~:~t:9 ~:~i~~~rei:~~~~~~itales - Despreciar primera parte.de la rniccion y recager la segunda parte Canservar en nevera maximo i'4YW : .:;", "'.
':\:~i~~~~j '/'::+", En nifios y ancianas· ",.,i "\iE"""", Boisa adhes·iva;2()I'~_<:t~~~ (smL) Sanda (~:>::","""!.;"::: Puncion suptClpub[~a (muestra no contaminada) y aspiracion (aseptica) "!~:~,--:..,;.
.: En persona? cOQ,~~~n~~::"germanente: tomar can jeringa 5-20 mL par puncion en el tuba de la sonda .
• --o~~~ MUESTRA ~~cQE? ~ ~ ~ m~.
DE HECES Muestd~~pp;e~9'~n.al: 5-15mL de heces Ifquidas~.
_ Transporte ..aYamblente < zh ~ ~' ~ ~ PRc:\~ '(b Trasporte prolongado (c-zh): [,<)-rBacterias: media de transparte Cary-Blair, T" ambiente maximo 24h Virus: nevera maximo 24h 0 congelas a -70cC (no medio de transporte) Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori 30 • c:t3.~<;;;;: r<l ~.
Centre d'Estudis ATP ©® e&;..c:> Analisls C1iniques i Diagnostic Centre de Laboratori MUESTRA DE ESPUTO .
Muestra convencional: esputo recogido por expectoracion tras tos profunda o Guardar en frasco esteril con tapon de rosca, sin medio de transporte o Conservacion: en nevera maximo 24h.
Instrucciones al paciente: o Primera hora de la manana 02 horas sin comer o Enjuague de la boca o lnspiracion profunda o Tos profunda y recoger el exudado en recipiente esteril Muestras (10 d'Estudis ATP ©® mL)~ altemativas (en personas que no colaboran) Aspirado con tubo endotraqueal Puncion y Aspirado transtraqueal Puncion y Aspirado transtoracko Puncion y Biopsia de pulrnon Puncion y extracci6n de Fluido pleural Muestras recogida con broncoscopio ~.::~~-w MUESTRA DE SANGRE ".~ ~~c"l~;\\1\lI'~, En micro se toman muestras de sg venosa: en casos de septit'e'mi;;l:· ..··:~FiCionesslsternlcas cursan can Fiebre, taquicardia, leucocitosis) Cantidad de sg: 10-20 mL (0,5-1 mL en nifios).
~se realiza un hernocultlvo para diagnosticar graves' (que el rni &:13,~l'~ La sg para hemocultivo se debe extraer c,r .g~ te£nTca rigurosamente aseptica.
1. Mfnirno de personas en la-habita'oradte laextracclon J 2. Guantes esterlles ~,:;;~...f7.' 3. Desinfectar el tap6n de go 4', '3 deTbs frascos de hemocultivo con povidona iodaday dejar actuar 3 ••.
minutos.
,'.
4. Colocar el tomiquete en braz:p.y .::6ger la zona para hacer la punci6n venosa \!U:':;"" Eo' t¥J 5· Desinfecclon doble del brazo '(onralcohol etflico (30 seg) y povidona iodada (30 seg) y del dedoguante donde se palpa Lq."y~na 6. Pinchar y extraer sg l 7. Eliminar el tomiquet$~Y;}\¥~fta'er la aguja sin tocar el algodon 8. Presionar con algq.9:i,1Diodado la zona de puncion <1-9. De inmediato fl}),ict~f.f5't5:'apartes iguales en frasco con caldo de cultivo aerobio (50 mL) y en frasco con cald(Fi:I~;-s~J(jvo anaerobio (50 mL). Agitar suavemente. A veces lIevansuplemento opcional (geLcftiD3l,fe5inas) :5 10. Limpiar el i.!P~9.J~~i:dual de la piel con alcohol 70" para evitar que irrite.
~r'1' Z ~ ~ ~ .
-~ II. t-.J~~~~ ~ a~ ticoagul~~~es~"B.OIi~[1etolsulfonato s6dico (SPS) ." :., .'.:;-, ~'.~/>i.: " ~G PJ'le, C) lYV"i~, ,-,--" st=:s I d~~.i)uede inhibir a Neisseria y a Peptostreptococcus .
En\~estos casos usar frascos con gelatina que elimina el efecto del SPS J~ -;,!.~ !!.;.."'~)-;.;I~;.-;"':~ Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori Centre d'Estudis ATP ©® Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori MUESTRAS Centre d'Estudis ATP ©® DE FLUlDOS CORPORALES La toma de muestra es por punci6n y se requiere maxima asepsia (doble desinfecci6n).
Realizado par especialista.
'~ ~ ~ tJ~ --rrz-c~ LlA~=a Volumen Redpiente Conserv~:Ci6n LCR • Bacterias, Hongos, Baci:la Koch ~ 1-3ml • Virus -tam~i~te.
Tuho 1ml 5-1B ml 'BaCllo Koch • Virus ~ MUESTRAS -:'; >:' NEVERA, mfucimo 24h sin n1~ioda fmnsp<>rie 1ml sin rnedio de transports ~ Uquido ascftlco • Baclerias, Bacilo Koch ~ Frasco 1 ml Uquido articular • Bacterias ," " ';>' Llquldo pleural y liquido perlcardlco • Bacterias, ~1~IT16 24h ~ ~ NE\IF~mfOOmoj2~ ..
.. ~ '. -',.' sin media de mmsporte N,~~maximo 24h Tuba ~ Frasco " ;'; sin medic de transportJ! 'NEVERA, maximo 24h ' 5-15ml DE EXUDADOS La tom a f\e muestra con escobill6n r$?~~ 0 par aspiraci6n.
lAI.
Mkrootganismo Muestra Conserva:Cion sospechoso Slrept()(;OCcus pyogenes 80rdeteJIa pertussis Exudado faringeo Virus Escobilltin con' " EscobiR5riij'" Mfparabl' " Escobil1o:rr~Q.B"MT para virus h.
~r,":'~."~~~~" T.ambiental, maximo 24h f!i!1 NIEVERA, maximo 24h NEVERA, maximo 24h Exudado Baderi= T.mnbi~ntal. maximo 2:4h conjulrltfval Virus NEvERA, maximo 24h pus .~}~: ..~,.~.·~~J~f~~~rF -'EscobiU5rncon MT para bacterias cutaneo, NEVERA, maximo 24'h subcutanea MUESTRAS ~La GENITALES toma de muestra can ' escoql~I'6!.:iembra junto al paCiente.~ ;~:_~., '~~t~},f~~4f.fr Comservaclon Torna muestra Escobillon Exarninar Escooi!l6n Observar tJrlce$ genrrates .:" .!, 'Xi Virus Herpes .' Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori y sembrar junto aJ paciente firm y sembrar jooto a1 paciente nevera 1 EscobiH6n con Ef1l medic de transporte de virus maoomo 32 24h Centre d'Estudis ATP ©® Centre d'Estudis ATP ©® Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori MUESTRAS CON ANAEROBIOS Toma de muestra con escobill6n a por punci6n-aspirado.
Muy usada: Sistema Vacuntalner P' Anaerobic Collector (BBL) C;;; Transporte anaerobio Muy usa do: Sistema de transporte Port-A-Cul TM I Tube (BD) ~ PUIilc:iOfl, Muestra aspiracian EXUDADO ahdominal, peritoneal, bilis 5 ml Trans porte ':<J?:~:'("'~IC'Temperatura Frasco con medio de transporte para anaerJt:.I~;~ ambiental maximo 24h <1; ..
ABSCESO (abdominal, 5-15 rnl hepatico) Frasco con ' ,,,';' memo de transporte para ar1~erobios Temperatura ambien1:aI maximo. 240 MUESTRAS DE BIOPSIAS Torna de muestra por punci6n quirurgica Maxima asepsia, doble desinfeccion <1f-,Realizado por especialista ..:~%o::;., Toma -de musstra .
Consew3'Ci9P.): ~4.)::.:(~.
~ii~ Granufoma cumneo MUESTRAS DE LA PIEl Gw.-\/(f) Toma de muestra par raspado, m[l:e tlf;.~;.l Muestra ConservOClQO' A temperatura cabellos, unas ambiem:e.
(Hongos) varies dfas Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori 33 Centre d'Estudis ATP ©® Analisls Cliniques i Diagnostic de Laboratori Centre d'Estudis ATP ©® Tema 18. Muestras obtenidas por biopsia 0 punci6n Son en ppio muestras esteriles, no contaminadas con la biota normal Tipos: LCR,.sangre, biopsia, Ifquido articular (sinovial), Ifquido ascftico, Ifquido pericardio, Ifquido pleural.
INFECCIONEN LCR: » Origen: . Adquirida: de la propia biota normal que atraviesa la BHE.
Neonatal: adquirida de la microbiota de la vagina materna Inmunodeprimidos, SIDA » Patologfa: produce meningitis Sfntomas: fiebre, dolor cabeza, vornitos, fobia ala luz ~ignos: rigidez nuca (signo de Brudzinski), petequias » Complicaciones: encefalitis, abscesos » Epidemiologia: afecta a todas las edades pero mayor inci~,~nci~;f-:"'h;-'i~-e-a-d-i-n-fa-n-t-il--' , » ~~;;:~j '"'.r- e.
Agentes causales: r;::,.
Bacterias: ~ \.
Nifios y adultos Streptococcus pneumoniae (pneumococo) Neisseria meningitidis (meningococo) Haemophilus influenzae tipo b ..--,-'.:;.....,_---- /ES;~b.f;Yjchiacoli !i\~;tr,]'P;tococcus agaJactiae (grupo B de Lancefield) 'L'eRi:eria monocytogenes .
;.J~\", Virus: Enterovirus f>,... '~£~~~~} Levaduras (meningitis fungicas): gTyptococ:;cus'neoformans » Toma de muestra: puncion lumbarJ\~::~~~~}I~:::::.)[t .
o Paciente en posicion adecua ..d~~:~aecubj~~;'lateral, cabeza inclinada hacia toraQ';~~ro.9i11as flexionadas o Desinfectar la piel: alcohol 79,;'~:f8tDgioniodada o lnflltracion de anesteslco lot~·I~~ ...)" o Introducir la aguja entre la 3" y''':~;'~ertebras lumbares de forma perpendicular o Retirar estilete y dejar ,saH.f'"librementeel LCR o Recoger en tres tubRi~~t~~IJes (Citologfa, BQ, Micro) con tapon de rosca /---::;; !<-GR 1: recuento leucocitario y formula leucocitaria ~ ~~~;~i~:J::~.~ ~ 0 '~.:~.) t~~';~2.~estudiosBQ e lnrnunologicos £; analisis mkroblologtco Extraer 3-5,~'~;tQl(,,~('(\.O Q SvV\L) » Transp.~:;:, ;~i~~~:a laboratorio, norefrig'ej ~ » no: g:~ntrifugC!;dora3000 g durante ~:\ » 15 min ~~~" iY'l<:"'&() &-"4'>"s y enviar sedimento a lab. Micro.
,;: ...",. ~ 'Analisis .,.
1°) Observacion directa e informar al medico de la presencia de microorganismos 2°) Tinciones Bacterias: tincion de Gram 0 de anaranjado de acridina Analisls ClIniques i Diagnostic de Laboratori 34 y leucocitos Centre d'Estudis ATP ©® Centre d'Estudis ATP ©® Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori Micobacterias: tincion Ziehl-Neelsen Hongos: tincion de tinta china 0 nigrosina » AisJamiento Bacterias: ~ o Cultivo: agar sangre y agar chocolate "','" (37°C; 5-10%C02, 48-72h), tb caldo tiogli;coJ?'to (37°C, 5 d~0 '(~0f o Tb deteccion de antfgenos (aglutinaci6n latex, EIA) "<~\:;~;:~;r' o Tb tecnica moleculares: PCR s Hongos: 0 Sembrar en cabinas de bioseguridad o Medio: Agar Saboraud dextrosa 30°C, 3-7 dfas I!!lJ Virus: o En cultivos celulares se observa efecto citopatico (ECP) o Tb tecnicas moleculares: PCR o Tb detecci6n de antfgenos » Interpretaci6n de 105 resultados Cualquier microorganismo aislado se considera , •• Informar al medico ;._ d~!riJ!lt~ccion responsable --';;::ii'1iO';~" •..•,t\ ~~\ "'-;;',4J;,;:" - -oq,j' '-~~~~~.,( Meningitis 1\il~tiG lJael(ltiiUII<!$ 'Th.bemi1c;sa AspeK'W CriStalmu 1Utbio celri4IsItrl T~ e-s 1,.000-10:000 ~Qn$fdi)fi1iJ SJ}.Sf) Protefuas (rrigfdJ).~ 15-45 L"i:n!ocl.tO$ :;.100 '-'.
» , '0.
;~i;/l;: Estudio de sensibilldad a antimicrogif,\,n~:sSe debe realizar con cualquier mLcr:oorganisni'o aislada Varios rnetodos a) Metodo de difusi6n con disc b) Metodo de gradiente de antibT6l!~t;:9'\~Epsilon Test (E-test) c) Metodo de dllucion en caldo -g~l » ~~';~;i} Caso clfnico Pc Nino de 9 afios previamggie s~';, comienza la noche anterior con fiebre 39°C. EvoJuciona alas pocas !-'......;~:{~;~ .
horas a una cefalea"fcpnfaktn~ensa y vornitos, Acude a urgencias donde ingresa con rigidez de nuca, comprometido de c~tt~i~nG<;:i~ y sin petequias.
' Se realizan prueb~~1i~,ptillci6n lumbar y se envfa a laboratoria, destaca: Glucosa 9 mg/dL,:;f: -"":""~--:il:os 1340, monocitos 13%, polimorfonucleares 85%, y proteinas 135 mg/dL Se inicia tratami~~~E) i6tico empfrico.
Se realiz,~ un~,,9.Jlci9. Gram y se observan diplococos Gram negativos. Se siembra en agar sangre a 37°( ~[lI~tmo§f'g!f.~H:le5-10%(02, durante 48h y en caldo tloglicolato a 3rC durante 5 dfas.
prueb~~~k~,:,~;5:~J~'icaspara confirmar Metod~';";'~;OI6giCOS Tratamiento <3:J CO\~ I7J ~~ ~-:-'*",~~ ~~ Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori I Q..>< ~®.
..
~-RC=~ I U(~pDn~ 35 y ~C\Jn2.CCf\cs\\5iE'A~ Centre d'Estudis AT? ©® Anallsis Clfniques i Diagnostic de Laboratori Centre d'Estudis AT? ©® Tema 19. Muestras de exudados durante su recogida or W ~ inflamatorioslMuestras que se contaminan Las muestras de esputo u orina pasan por una zona que contiene biota normal y pueden contaminarse, 10 que detectar un microorganismo no indica necesariamente que sea el responsable de la infeccion Para que el microorganismo sea responsable: -debe aislarse de la muestra en concentraci6n elevadJ .
-debe haber presencia de leucocitos ~ - el paciente debe presentar sintomatologfa TRACTOURINARIO Uretra tiene biota normal Vejiga, ureteres .
y rifiones 50n'.~·?Mril~~.· ,,~,,··.-:-J::)":?:-~'u' Origen de las infecciones del Tracto urinario:;"'; ~.
Ascendente: de la biota propia del intestino grueso que asciende por la uretra hasta lIegar ala vejiga urinaria.~.
CG...t.A.s-z.. c\:::: ~.
Gf)n~J~: • Hematogena: el agente infeccioso lIega por sangre al sistema excreter Producen: uretritis, cistitis, pielonefritis.
Cl5TITI5 5intomatologia: + Urgencia en orinar (tenesmo) + Molestias al orinar (disuria) + Hematuria • Frecuenc;:~'~f~~!~~,?' (poliaquiuria) + Pesadez.Ra;R~~g~j~del abdomen .H::~:); Principales pat6genos lnfeccion hospital aria Infecciqn1!x\~?hospitalaria -4:: Escherichia coli Proteus vulgaris 42% 6% ~:;.,,;{;;TI'~!?'90% ,c£".;",.""e"';.,,",J'S% 28% Pseudomonas aeruginosa ,.':"!i:~,\, '""}./ 6% 0% Toma de muestra de orina: o Reducir al rnaxlrno la contarrlfr1'acidX.
'0 Dar instrucciones al paciente p~f~;'iarecogida correcta de muestra .: (...;!~~</; Tipos de muestra: ,', :h'i'{~.,~~ / o Micci6n espontane9;'~'~ o Sondaje uretral. "fY:':;;:., ' o Puncion suprapub,ica.·;"~·" ~~~d!.c:.
.
..
~;: ,.:~::-.~:.
,;·'._."c,-"" Transporte: no deb~:fDq9iffcarse la biota de la muestra desde su recogida hasta el analisis, transportar 10 mas rapido pOSiblE;.:Y;proc~:Sar antes de 2h Si no es posible: (olJs~g?ar en nevera (maximo 24h) Si no es po~)ble:~9.kiqnar conservantes: acido b6rico 1,8% (24h a To ambiente) Analisis~e 'O:ina' :.';; ',C ~ 1) obseDia,cipnc:lirecta nos inform a Desi 121 rnuestra esta bien recogida y tratada y si podemos continuar con el analisis De los medios de cultivo adecuados 2) Screening = cribaje (opcional): Gram directo de la orina 0 Gram del sedimento Permite conocer el n° y tipo de microorganismo y el n° de leucocitos Anallsls Clfniques i Diagnostic de Laboratori Centre d'Estudis ATP ©® Centre d'Estudis ATP ©®~R.
Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori , 1 p C~\-+\~ 7.:)?sl~r9 rv,~~ db ~ 3) Aislamiento y recuento -"~ Q e Cuantificar el posible patogeno con un medio enriquecido Para el recuento: sembrar con asa calibrada 0,001 mL de orina en medio rico agar CLED 0 agaf=-~'{S\.~) me sangre, O':i"F~~';-;~~j"Z;;;;'~ 4) ldentlficaclon: 5610 se debe identificar crecimiento dominant~ el microorganismo responsable 0 .~ EMB ,)::\:~,r' placa con 10-100 colonias 4 5 (10 -10 .
de la i1)f.~:~~i6n,~~~~tudia el .t';':':':~o';"".
, placa con > 100 colonias en recuento ~ , ,', • Aislar el posible pat6geno con un medic selective Sembrar por estrfa en medio selectivo para E. coli como agar MacConkey (>105 U FC!mL) :',' ", ,..,.":.-.
, UfC/mL) y presencia de leucocitos, sint:d:~:a'tbl~;gfa .
Bacilo pequefio gram negativo OxidasaCatalasa + Movilidad + Crecimiento en MacConkey: +, lactosa ., .( Rojo de rnettlo + Pib'skauer ~~~~.;f:i.'.~~ f..it + E. coli Enterobacter 5) Interpretacion W-~~~ ~~~.
!Repoe-tirW<U'1!)11:1Y;J;ml,le~lriI: lPi'oOOb[s R~Jl'clIrwnlb~lma~ (f~ ~~~) WomIlIfde! re~~ iI!~!ixJQ~rm~~ ;"~.~;2~A 6) Test d}ts'eiisibili€lad a antibi6ticos .;;;: ".':' Caso cJfn[¢o,;" .,: Una joven'!d'~:'2i-'i;nos, al mes de iniciar relaciones sexuales con su pareja comienza a notar molestias orinar, como urgencia, escozor e incJuso observa la aparlclon de pequefios coagulos de sangre. La doctora del ambulatorio Ie indica que probablemente tiene una infeccion de orina pero quees conveniente confirmarlo con un anallsis de microbiol6gico.
Anallsis CJfniques i Diagnostic de Laboratori 37 .
al Centre d'Estudis ATP ©® ~ Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori Tema 20.
Muestras procedentes Centre d'Estudis ATP ©® de zonas con biota normal.
Problernatica: Es diffcilobservar y aislar el microorganismo patogeno porque hay muchos microorganismos propios de esa zona. La observacion directa no siempre es rrtil, En el aislamiento hay que usar medios selectivos y/o diferenciales.
Biota normal: Heces: 10"-10 bacterias/gramo de heces Tracta respiratario, piel, y uretra y vagina del tracto genital 12 Muestras de heces 0 Tracto respiratorio superior como hay mucha biota norm~les~Hffi::ilidentificar el microorganismo responsable T;:.:;::':{;{.LJ En la plal las infecc.ionessuelen ser mixtas En las muestras del tracto genital si suele dar buen resultado la observacion dir;:~cta'~tinclon.
<.
MUESTRAS DE HECES Microbiota fecal normal: 10"-10 microorganismos/g heces ,j" _99,9% anaerobios estrictos (Bacteroides, Fusobacterium, Bifidobacterium;Eubacterium, 12 Peptostreptococcus) 0,1 % anaerobios facultativos (Enterobacterias), , Microorganismos causan principalmente e~tis, patolo~fa;~~~;;¥f:~cuente o En parses subdesarrollados afecta st a nifios, se agrava Q,o?ia;;cl,esnutriciony tiene elevada mortalidad.
La principal causaes la falta de higiene '~~~:''''i,l'J' o En parses, desarrollados afecta a nlfios y a adultos y e~!lfD~_i:gr~ve en lactantes y personas de la tercera edad.
/:Jit:t(;~::1~i' > lnfestaclorn principalmente por via oral (feCal-ora;~~~q,I.1_S:~'~~ de agua y alimento contaminados.
Principales agentes infecciosos: ' /c,." !~;~~i~~:Z2;;' • Bacterias: Salmonella enterica, Cag{pyL'9bac{efJejuni • Proto zoos: Giardia /amb/ia Virus: Rotavirus, Norovirus _~~~~?::;.;Jr.q,-,! ', ::'~:~~';~~ \ -", Mecanismos de Patogenicidad: ):if,~Ii"\'_ • Invasion: Salmonel/a, Campylpb~~ti;!.r1Shigella, Yersinia~ • Enterotoxinas: Vibrio choler2i~/Q_9~tridium difficile • Toxlnas preformadas: Staphyl;~-o"~cus aureus, Bacillus cereus, Clostridium perfingens • Destruccion de celulas';;;;'i~as=tvirus ;;~>, 9~:i;,::,:: ..:::jij _:'1"2}-:.
• Sintomatologfa: o Diarrea y ocasi.oD~lifi~Dtefiebre, dolor abdominal, sangre y pus.
o Diarrea muy 11(1'6i9?!~n~guade arroz: Vibrio cholerae~ o Toxolnfecclones: i:j~'H;:'dode incubaclon muy corto, diarr:eas y vornitos o Virus: vomitqs'ab0ndantes y diarreas en nlrios, clfnica de corta duracion, .l" ,', i·"·;. _ :~.
Analisls Clfniques i Diagnostic de Laboratori Centre d'Estudis ATP ©® 1 L F I Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori Centre d'Estudis ATP ©® Toma de muestra o Heces diarreicas (a veces con sangre y mucus): recoger en recipiente esteril de boca ancha.
Cantidad: 0,5-2 g (5-10 mL) o Hisopo rectal en medio de transporte Cary-Blair (medio de enriquecimiento para Salmonella 0 Vibrio) Una vez tomada identificarla correctamente con informacion completa del paciente y del cuadro clfnico.
Indicar tarnblen circunstancias especiales: viajes, toma antibi6ticos.(;:~~j~;, . ;: ~:.:.
Transporte: procesar la muestra antes de zh.
Si no es posible: utilizar medio de transporte Cary-Blair para bacterias Shigella) y procesar en menos de 24h.
\' '""<:".
0 refrigerac:f6n a 4°CN:5<cepto /';\>::~..
' ~,?;~~.; Anallsls: 1) Observacion directa: poco uti! en muestra de heces'>;",~'" Examen rnacroscopico: puede orientar porque permite observar sangre, rrl'9,c6:"J~s, agua de arroz Examen rnicroscopico: poco utll, no siempre se realiza.
"',..
2) Tinci6n Gram: poco util, Puede ser uti! para algunos microorganismos c(;:mrnorfologfa muy caracterfstica (Campylobacter, Vibrio ),~}: 3) Aislamiento: es muy diffcil Utilizar medios selectivos y ~ ('(\~ ~);'e::~/':::.v;;'fZ §f G-<.::sc..n ~S Se puede hacer enriquecimiento en medio Ifquidos y aislami~ntQ,:erNpedios solidos selectivos Cultivo de heces = Coprocultivo '" )f!.t:h, ",,;f', 'iSI~!"'~;~ reclO !A':.~~!~~ultane'mente un enriquecimientoy ~I -b t= V2.-A"TCl = Enriquecimiento: medio selectivo caldo selenito . .,7°C, aerobiosis, 8-12h) Aislan:iento e~ :nedios solidos selectivos y dl ~e2,ti~!:;,.);",~'7oC, aerobiosis, 24-48h): De baja selectividad: MacConke.y 0 EM 1}';';,4, .-..
De selectividad media: XLD, SS, Hektoen )t.,:,"'~lk~f o Buscar colonlas sospechosas: colonias q~;, n~~rii:~ntan lactosa = colonias blancas/transparentes medio MacConkey 0 SS Y colonias rosagl'a$~con pUlJr(o negro en el centro en XLD.
/"" .
" o ldentiticacion BQd~ las colonias: '~~ ".
, ' " " ."1f!:@~/:' ~~i8i'." Bacilo Gram negativo Oxidasa Lactosa Glucosa + Para identificar ~,~ en coloniafspsp~chosas: P~bduce H,S + Lisina descarboxilasa (LOC) + Indol f3-galactosidasa (ON PG)sistema API20E (BioMerieux) ;!.!.
"~ 4) Interpretacion: ,,J.:';; La presencia de sal~gil'~!~~,~p'hece? de enfermos gastroenteritis se iri~ttpr~~arcomo responsable.
y en allmentos implicados en un brote de I/VV\A.Jv....Jv ····:,'!tftlt ~ 5) Estudio de sensi"antimicrobianos: ~ ~se ~ ha.ce s~:~ . -.,.~ ~ . prmalmente ROTAVIRUS,:, \~,;\;!,.,-",,;~i~ 'S:!:::::() no:e administran un cultivo celular Diagnostico de laboratorio: detecci6n ~g~s latex 0 por enzimoinmunoensayo (EIA Analists C1fniques i Diagnostic de Laboratori Q.u.\t::)~m\R~QS'.
df2..~2S Toma d~:;:;';uestr;'j:?~;nsporte: igual que bacterias.
Observ~tion direc'ta: no se realiza Aisldmferl1f$l:}~:d~behacer antibi6ticos .
\~ V~ VlriCOSen heces par el metoda 39 de aglutinacion en Centre d'Estudis ATP ©® Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori Tema 2.1.
Centre d'Estudis AT? ©® Estudio de sensibilidad Antimicrobianos Origen: natural a antimicrobianos = antibacterianos, antivfricos, antifungicos (antibi6ticos) 0 slntetico (qulrnloterapicos, y antiparasitarios cltostaticos) Objetivos de 105 estudios de sensibilidad a antimicrobianos: o Detectar la resistencia natural o Detectar la resistencia adqulrida o Para poder establecer un tratamiento adecuado: ~~cuando se realiza? una vez aislado e identificado el agente causal Tipos de bacterias: 1.
Habitualmente sensibles" 2. Moderadamente resistentes: son cepas no muy sensibles a antibi6ticos concentraciones elevadas de antibi6tico.
,,'ii' 3. Variablemente sensibles: son cepas de sensibilidad impredeciblec;,;:' 4. Resistentes: presentan resistencia aantibioticos Metodos de estudio ~ A) Metodos cuantitativos: 1.
perrnlten M~todos de.diluci6n deterrninan en me~o 3.
~;.~~glr~:~iJ D '4'-.)'CS'\~ c:aI~~~1v~!~~~~:~~:~ ~E~~::~i~ar S, Metodo de difusion en agar = Ant~I?!QgralJJa .
CMI: concentracion metoda '..7-;:~; § .
mfnima inhibitoriapermite DE DILUClON Caracterlstica: Ifquido d'''fr,'''- I.::'::::.:"":{i!~!:~~f ~.~eQ;iIf~)?f~ B) Metod:; METODO , eM , }I'que precisaran EN MEDIO l!9!:!!~)d"..
(resistente) ~ ~~~~ '.
':"~~':~'~~~/i ev~j'G1Ijjdvitro la actividad de un antibiotico, ;;r\:;;,~;~c:~U~ sencillo y d~ lect~K~~,~:~,sr6r5opica ( /.-q['{.'_"::;:.:I.).' ) ,': Procedimiento: ::'~~:'ih'i'<"i;~;~(?i.' Inocular la bacteria patogena en uIJ~[§erie de tubos can medio de cultivo y con cone crect~nle,.de antiblotlco.
i~:;8_}·,:,:.5:W ..;:.;,:,. ...
METODO DE MJCRODILUCION"Et;!;,L1QUIDO Placas de poliestireno can nurA~rbs9.s pocillos con media de cultivo + cone de antibioticos .:.';~y" ' Existen comercializadas pl~.da.?de microtitter can antibi6tico liofilizado incorporado y solo hay:~q'~e afi~'dir el media de cultivo Ifquido (200 jJL) can fa bacteria .:":,'.:"; a analizar .
7,., EPSILON-TEST :;~;\i~i~~ ... :';~~,:., Es una prueba difusion.
de difll~i6n{en gradiente ...' 'i- que cornbina la simplicidad y la flexibilidad de las tecnicas de Consiste en~na.tIr.a qye esta recubierta de un gradiente de antibiotico.
Sobre la s6p~rficY~ d~la placa sembrada con el microorganismo problema se coloca la tira y el antibiotico difunde hacia la placa y se forma un gradiente alrededor de la tira (Incub;3rY~;r,,6ptimd).
Observar 13zona de lnhibicion elipsoidal y slmetrica Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori a ambos lados de la tira.
40 Centre d'Estudis AT? ©® Centre d'Estudis ATP ©® Analisls Clfniques i Diagnostic de Laboratori METODO DE D1FUSION EN AGAR = ANTIBIOGRAMA o Metoda muy sencillo y relativamente econOmico.
o Se dispone de discos de antibiotico que se coloca sobre el medio de cultivo solido y el antibi6tico difunde hacia el cultivo.
o Se mide el halo de inhibici6n alrededor del disco con regia, pie de rey, cornpas, etc.{Tb rnetodos automatizados).
./::':C:: o S610uti! para microorganismos delcrecimiento rapido. ]9.':') o Metodo totalmente estandarizado para el procedimiento y para la interpretaci9hseG~aQJablas estandarizadas (se compara el halo de inhibici6n can el que sale en las tablas)6i,\.7' .
~ pOo Los resultados del antibiograma tiene buena correlaci6n con los valores cua~t~1jt~Y9sde CM!.
@Jf/ .
EIresultado puede ser: sensible, intermedio 0 resistente. ~ ~.
~~ ~cm~ .
o Control de calrdad: al hacer el antibiograma se incorporan cepas de sensibifia~:(f9H'esistencia conocidas y se mira si su halo es correcto .
.. .
Son cepas de colecci6n = ATCC(American Type Culture Collection) Staphylococcus Escherichia euteus ATCC 29213,25923 coli ATCC 35218 25922 Sireptococcus oneumoniee ATCC 49619 EnterococcustaecaJis ATCC 29212 Peeuaomoneseeruqtnoee ATCC 27853 /4~~!:;\,;.,,, Haemophylus influenzae ATCC 49766, 492&.<:·~~~;*f)" "?i!}~:D,:b" Cempytobecter jejuni ATCC 33560 J§~~~:~.\:.
..
En todas las tecnicas es imprescindible utilizar pat microbiol6gicos usados.
Q~~Y'~~:{~~ control de pureza ~,.,..
-r.-•.•• de 105 cultivos j, 0£l ~I ~ medico es quien elige el antibi6tico a uti~~~ e' ~~ funci6n de: • Los resultados obtenidos en el antibiogram~i'-'l" e EI orgafio 6 tejido donde se 16cql~~taJ~'nfe~i6:fi ..-.
• Las alergias a fcos del enferm~l~ t' .
• EImetabolismo del fco y su ; T~._~~"eliminaci6n Anaiisis C1fniques i Diagnostic de Laboratori 41 Centre d'Estudis ATP©® Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori Centre DIAGNOSTICO SEROLOGICO: deteccion Ejemplos: neumonfa, sffilis, hepatitis VIH (Virus de la inmunodeficiencia de a~genos 0 d'Estudis ATP ©® anticuerpos B y C,~ adquirida) o EI SIDA es la ultima fase de la enfermedad producida por VIH (virus de la lnrnunodeficiencia adqUirid~ o Se caracteriza por la presencia de infecciones oportunistas graves y ~os tumorales z: D o EIvirus induce la destruccion de lin!'ocitos T CD4 .,<CY . "* \D @N> o Hay d~s vi~u~: VIH-1:~IH-2 ....v~~"':'! ., .
] ] o~t'I~~:~~~l~~~~i~~~1::~!~:{::~:~' .n~.~.:y~J . n") • • 3" Fase: inicio de 105 sfntomas4" Fase: SIDA (enfermedades oportunistas, ..
lY:' SNC) b-~-7.-~-'~--~"~r-~~~~~~~~~ - S~m;.)lIw . -.. 1 2 ::t .J s G 1 4;t :rn{)1; Diagnostico: • Deteccion de anticuerpos por pruebas setologicas (~!e-) • Deteccion de antfgenos del virus (Western Blot) . -;"./;;;~\>, • Deteccion de DNA proviral integrado en las celulastiQf~.~tfd~$·portecnicas ! rI moleculares ;;~~;'~~~~f?~?J' r Seguimiento de la enfermedad ";ii~j),-oj' • Deteccion cuantitativa del RNA de 105virus cirCLifan;t~~':~~sg (carga vfrica) • Determinacion del n° de linfocitos T CD4 . /;tt;.•;o,·i~~Cf ! ''':'';{~)':i::'::;;§ Enzlmoinmunoensayo (EIA) Muestra: suero del paciente Placa de microtitter s: Se fijan 105 antfgenos virales en 105 pociHP:~,d~J~.p)a.ca l':,~~ Se ariade muestra de serum con posibJ~~A~;~~"~i~:;.,./t .
:;.::.;...•~ ,.~..
-,'":.'~~;' '.(~".
...
Resultados:,A-;;;:r,o, ""r---.
~» Ne~a.tivo: no i~feccion (exc~'~16'c~QJperiodo de lncubacion) DC .
POSltIVO: repetir 'Y1j~.,.!, L---DNG' }"=:J..Y .
Si la repetlcion vuelve a dar positivo c6Afi;mar con Westem Blot (poner en contacto el serum del enfermo con Ag virales especfficos puri~!ca~o~ y separados en una tira de nitrocelulosa).
EIresultado se considera po~.itr~.<?:~~Lgetectados de las tres protefnas utilizadas como Ag: gp1§Q/120;\j):' gp 41, P 24 .
~» . _:_t, Durante el periodo ini~iaJ,,(~'~~hi:~nas-3 meses) el individuo es seronegativo mediante deteccion cleJ Aifp24 por tecnicas EIA.
y el diagnostlco se ha realizar "-=.-):-j',: Despues de este pe~iqd_~jk~ personas el dlagnostlco s~rot6gkd.
Analisis Cifniques i Diagnostic de Laboratori infectadas presentan 42 Ac anti VIH durante toda la vida permitiendo Centre d'Estudis ATP ©® .,..'- .
( ( .....
'.
~~~~:r:;; ..
,;....
Analisis Cliniques i Diagnostic de Laboratori Centre d'Estudis ATP ©® PARASITOlOGIA Tema 22/23. Diagn6stico en Parasitologia clfnica.
a) Diagnostico directo • Diagn6stico microsc6pico: observacion al microscopio Diferentes tipos de muestras: o Parasite intestinal: heces o Parasite hernatico: sg o Parasito tisular: aspirados, biopsias, cultivos • Diagn6stico Inmunolcgtco: detecci6n de Ag =~ ~~ Tecnica mas usada ELISA (Enzyme Linked lmmunosorbent Tb Inmunofluorescencia • b) Diagnostlco molecular: indirecta detecci6n Dlagnostlco indirecto • Diagn6stico inmunol6gico: I'::::, A's~gyk}:i""'/ (IF!) e inmunocromatograff~,:':,'::':':<' de DNA 0 RNA del parasite detecci6n (~2~) de Ac , Parasitos en Heces I ~ DIAGNOSTICO MICROSCOPICO en heces 1) Consistencia 2) ~'""\s\~7~<''}::~'-: a) de, larvas de hel~i,hJ()s.
Observacion directa: E!: motili~~d ? E]: proglotldes ( (-eccse...
blandas, semi~~q~:\:~:f:~;l~rfqUidaS ~~flb de las heces: formes, Heces: varias opciones <J ./ ~ ! ; de protoz~os t~ofoz?,if~~:d. ~e:E.histoly~ica, Gia:di~ sp .
de TaenIa sagmatayaquLtos de Ascans Iurnbricoides.
? ~~::~:~~~:~:n~~Oo5~;~~~~~iJ~t~~: A contlnuaci6n se puede hacei\i;';ci6n'~'t~mpo,anea con lugol (UKI).
b) Depositar las heces en,ptfp,~Lde filtro y retirar el exceso de flJador Tomar una parte de las h~C~rS(J.n un palillo cilfndrico y depositar en portaobjetos movimiento en zig-zag ''\'',:},;J ,.....
con un ' Tincion de Heidengei", " z: \DY'lb~ .
1°) Alcohol 70°, 2°) ~yrf?~oferrico am6nic al 3%, 2-8h, 3°) lavar con agua 4°) Mantener er{goi'Gti6';; de hematoxilin ferrica 6-24h 5°) Lavar con"agi,l'Ci,y.afiadir sulfate ferrico 1%0 acido pfcrico ..
- -'<::" ;',~:./f.
Tlncion de G6rnod·i: 0,6 g de {rgp:)pt:~~po 2R, destilad~Xr?;,a'g ,: 0,3 g de verde luz, 1 mL /.)\'(Iks.
de acldo fosfotungstenico.
....
a acido acettco glacial, -.L ~ ..
,,-:;=J-~~ . Tomar una gota de la ~.
.: FijaCion con formol, SAF 0 MIF Y tin cion de Ziehl.Neels,en "f 0t\R\SC)'S 1°) Frotis sobre portaobjetos, fijaclcn con metano!.
'--../ 01 A~ 2°) Secado y tinci6n con fucsia.· .
3°) Lavado y tinci6n con azul de metileno 0 verde de malaquita \.
r-:- -( Anaiisls Clfniques i Diagnostic de Laboratori mL de agua ~'2..daS' D p~'S' c) Jijaci~~,n,c~n MIF y observacion directa clc'S Resuspender cuidadosamente en MIF (mertiolato + lodo + formal suspension Y mirar al microscopio entre porta y cubreobjetos .
d) 100 43 \tdffi \[\\D'"'S C 'Y~.
TS' ~~\ ~ ~ Centre d'Estudis ATP ©® Centre d'Estudis ATP ©® Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori ~~~ e) Fijacldn con formol, SAF 0 MIF Y concentracion: tfpico huevos de helmintos Concentraci6n afiadir eter 0 acetato de etilo, filtrar a traves de una gasa = y centrifugar f) (Metoda difasico a de RitChi0~CQ..I) , Metodo de Kato-Katz Tratamiento con glicerina y coloracion can verde malaquita.
Se usa para evaluar hU~ de helmintcis g) Test de Graham = Cinta Para Enterobius parasttos de Celo y vermicularis Taenia sp.
Parasitos en Sangre Puede " ..' " ser importante la hora en la que se recoge la muestra de sg y el anticd~g'tfl:~iivtutilizado 1) Examen en fresco: LO\'\ \flrc.r;2:"S N .
'\(,(, " a) Frotis en fresco: micr~arias, forrnas tripomastigota de Trypanosomb Tlncidn Giemsa y observacion 300 campos, 100X .:~it" b) Frotis y Tecnica de la gota gruesa, tin cion Giemsa: paludismof Trypcnosornc, filarias c) QBC (Quantitative Buffy Coat): por ultracerrtrifugacionse-separan 105 diferentes componentes.
Util por ejemplo para malaria.
. \;'~$.jf.~'~~i • d) Metodos .
"{}~~~f~~- de concentraci6n Concentraci6n ,...
!.~~.t.!'.
s- por separaci6n de la capa leucocita4~,~};;c..," Trypanosoma ~,,,,,, Filarias --' i .
ficoD .
.
J;:':~';.'!J.", P'3sma Monoc~ p::; ~ .
.....,.;- Clrojos .:fJ.f~,~tl""'~~tf-;;;.. ~: Concentraci6n por separaci6n'a~ft!:!'Qnp(ifos(Ficoll); coagulacion can citra to y separacion de losZfi;l",~noc(ftrly Util para Leishmaniosis visc¢S5!!,Tripanosorniasis y Filarias linfatlcas En Leishmaniosis visceral tb ;jjU~;~tre.?de puncion esplenica, esternal, cresta ilfaca 0 ganglionar.
~~i~s. ~:J'v~}~? Concentraci6n por hem6Iisi~;"~fp'?ti microfilarias Fullerborn (con agua de~ti,t9da), Harris (can saponinas) e) Knott (con farmol) ldentlflcaclon de,cRJ;~~~S~l~hematicos con colorantes fluorescente~-ny ~ Tecnlca de Kaw,?~I:!1oto:'tinci6n con naranja de acridina => DNA verde y RNA ro]o i) ~:~~:~: ~:t~t;~;~~~1;;ar h) 0 mb.
Tecnica d~~lr:jprgicentrifugacion: Trypanosomas .cJr''-\''~lr1:~ii Tb se pueden , ~C)~ ~ tomaf:i[l,q~.s:fras de aspirados de ulcera,Lnodulos linfaticos, rnedula osea y LCR 2) Cultivoz.se U~\~~(~,p;:;;~jempIO para Leishmania, Tripanosamas fV1ed1; Nt,tN'{iTIedio HMI9, medio Schneider '.~.
y Toxoplasma ~, 3) xenoat~gn.,?~Y~o: se utiliza par ejemplo para Leishmania -o~~ ~\\ ~"'", '·';:.>~"'V 4) Inoculaci6n experimental 5) Inoculaci6n a animales a animales susceptiblese de experimentaci6n:se Analists Clfniques i Diagnostic de Laboratori se utiliza por ejemplo para Leishmania aplica para Tripanosomas 44 (ratas, ratanes blancos).
Centre d'Estudis ATP©® Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori 6) Detecclon a) Centre d'Estudis ATP ©® de Ag en sg: por rx Ag-Ac Por Inmunoensayos: Ac monocionales Se pueden obtenidos Ej. Aplicaci6n: determinaci6n usar Ac monocionales (ELISA) policionales 0 por la tecnica de los hibridomas de la prot HRP II rica en histidina del paludismo Ej. Detecci6n de Ag de filariosis b) Por inmunocromatograffa: detectar Ag circulantes 7) Deteccion de Ag en orin a: tecnica de aglutinaci6n Aplicacion: deteccion 8) Determinac~~n de Wuchereria bancroft; en latex de Ag de Leishmania' de Ac =.J:)~.
~ "2..
Se puede utilizer Ag enteros a purificados "SQ~\.~ 0 slnteticos ~~ ."";7:"> recombinantes 0 inmunol6gicas: latex, HD, HAl, IFI, ELISA, lnmunocrornatograffa, Ej: detecci6n con esquizontes de Plasmodium Ej: detecci6n can Ag enteros de Trypanosoma malariae procedentes gambiense (Card Agg/u{ihation con otros helmintdsYDo presentes de S610 uso para detecci6n ~~stern Blot dt;,'~enfermos en fase aguda.
Para filarias es poco uti! pq hay rxs cruzadas y pasada.
.' (~~1i~i=~~poS en un organismo " .; ! heterologo).
Tecnicas -v, Test permite = color azul).
distingulr infestaciones tg especfficas "}f~ktt~'a Brugia malayi ,".
...• Parasitos en Orina ,r;:; .: Examen directo Concentraciorn Trichomonas vagina/is Sedimerrtaclon: Echinococcus granulosus ':~':;~ " \~~~:}':'>:~' t ;'~At~id~:cion: shistosoma hcernctoblum Parasitos en exudados uro-genitales Examen directo Concentraclon/ Centrlfugaclon y Cultivo: Tr;ifh6ni6ri'b.5 vagina lis Parasitos en esputo y lavado br3n~oalv~'~lar Examen directo ,:;';,\ ";'~/<~<' Concentracion/ Centrifugaci6n: La!Yfl~c~'eStro~gyloides, Leishmania, Huevos de paragonimus'i,t'\ ..., <.....
Parasitos en piel: "!.: Taquizoitos de Toxoplasma, Amastigota de ;~;~< .,.,' Sarna, larvas de mosca Tunga, ,\?ipjos, etc.
Parasitos en otras mue~tras~ .y Tx hepatico: amebas " LCR: tripanosomiasis ~frican'j, Cerebro: amebas facultativas -', '.'!: Analisis Clfniques i Diagnostic de Laboratori Ganglios: Tripanosomas, Ojos: Acanthamoeba 45 Leishmania Centre d'Estudis ATP ©® ( ( 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 La sensibilitat i l'especificitat diagnostiques duna magnitud biologica depenen del valor discriminant triat l\.ni2r~ci'C; d:: Ic!f?fO"":'lC) Les regles de Westgard serveixen per a l'acceptaci6 0 rebuig de les series de mesures A mesura que augmenta la precisio d'un procediment de mesura baixa la seva ve~fj:ciiHt \1'!:X;<'1 Un agent biologic de grup 1 pot causar una malaltia greu en una persona sana, pero no presenta rise de propagaci6 per ala collectivitat.
L' autoc1au es un equip associat especialment a riscos quimics. '-\~:N.)\..:cC,\c.s"\ )/,'0''0 i'Jvl, I Per l'extinci6 d'un foc en un laboratori es pot utilitzar qualsevol tipus d'extlntor que estigui .
disponible.
La roba de protecci6 i Ies cabines de seguretat biologica son barreres primaries.
En l' etiqueta dels productes quirnics, les frases H substitueixen ales frases R segons el nou reglament eLP (CE, n01272/2008).
En los informes analiticos no resulta necesario que conste la informacion identificativa del paciente y del laboratorio ill tampoco la fechas de realizacion del an2Ji~is.
Los lirnites de referencia para cada magnitud bio16gica se han de indicar a continuaci6n del resultado.
Con los residuos sanitarios del Grupo III se ha de observar medidas de prevenci6n en su manipulaci6n, recogida, almacenamiento, transporte y tratamiento tanto dentro co!llo fuera del centro gerierador.
La ISO 15189 es una norma especificapara laboratories clinicos.
Los residues cortantes y punzantes se reeogen en recogen en bolsas de plastico convencionales con la identificacion "Residues de riesgo".
Els parametres del perfil lipidic s6n molt' estables i practicament np presenten variabilitat biolcgica intraindividual \..r'r,'-.:C\.~'::; OJJii:,.-E:'-.U:)") , .
liea pnncipa -.-.~ 1rmOR;motema ~,,-.- ant1at€Tog€DJciij..esa .
~ . la" 1 LDL' \.~\ c,-"k .s·,,! U',-, ( c."-jC Per a la determinaci6 de cole sterol total (mg/dl) es fan servir metodes immunologies ~-G\'2,;,,{0';"'(..r.ci") De rnes a rnenys concentracio de proteines: HDl>LDL>IDL>VLDL>QM La formula de Friedwald perrnet caleular els ValOISde LDL-eolesterql sense necessitat de \1 --J C.
1 r-: \=" F \! V l= V V I 32 33 34 35 36 37 38 j mesurar-lo \,.d.f~l,. i!l-)C,Z-I;l.t-\"2-) V , t::" -..~ !' e-: l'r r\/ V .
39 iJ La Hemoglobina Glucosilada (% HbAle) es millor indieador del control metabolic. de la .
'\.j Diabetis que una glucernia puntual 40 EI TTOG (Test de Tolerancia Oral ala Glucosa) es util pel diagnostic de Ia Diabetis, de la Prediabetis i de la Diabetis Gestaciq~al, pero en cada cas s'han d' aplicar Valors de V Referencia diferents \\\;' 41 LaHernoglobina Glucosilada (% HbA1e) s'ha de mesurar en deju perque augment a despres C ~ dels apats 42 La ictericia 0 elevacio de la bilirubina serica es indicativa de lesio hepatocel-lular u ' obstrucci6 de vies biliars 0 hemolisis excessiva 43 Una elevacio .del ' activitat serica ALT (GPT) es indicativa de l.@-S,}e-Beflat~seH·1l"lar ~0 t~ 44 Els brots aguts de les hepatitis A i B acostumen a perdrraT en forma de hepatitis cronica F Les societats cientifiques recomanen l'us de f6rmules matematiques que perrneten estimar el.
-V filtrat glomerular a partir de la concentracio de creatinina 46 La concentracio dels ionssodi, potassi i clorur en sang es deterrninen. per potenciometria V 47 En condicions fisiologiques de norrnalitat, no s'esperen trobar proteines en la orin a . :.
V r48 La unitat de mesura de la Osmolalitat es mmol/L i'1"'a\l\'~i !ZS '.
7.75, i es rnante dins daquest marge gracies als 49 El pH sanguini es troba entre 7_J.-?iamortidors fisiologics, sent el mes itilportccit el sistema carbonic/bicarbonat.
50 Les concentracions de glucosa i urea/en serum es mesuren per tecniques enzimatiques, els \,J canvis dabsorbancia es relacionen amb les concentracions .,,' I~ ..- ·2- Analisis Cliniques i Diagnostic de Laboratori Centre d'Estudis ATl-' (gQl) Examen 2010 (Bloc Jill) 1 EI titular d'un laboratori danalisis cliniques sempre ha de ser un farmaceutic 2, , Un deIs objectius de I' especialista en analisis cliniques es elaborar inforrnes 1 realitzar interconsultes c1iniques ..., .J Els laboratoris publics estan autoritzats per fer estudis de rnes complexitat que els laboratoris privats 4 Els farmaceutics especialistes en analisis cliniques nomes paden exercir la seva professio en un laboratori de titularitat privada 5 L''activitat desenvolupada per I'especialista en analisis cliniques permet, entre altres, facilitar el seguiment clinic de la malaltia 6 L'etapa preanalitica intralaboratori compren els processos que tenen Hoc des, que la mostra arriba al Iaboratori fins que es produeix la seva analisi.
7 L'automatitzacio del fraccionament de les mostres sol ser una de les causes d'errors de la fase preanalitica intralaboratori. (~i\lf'CS\1~~') e~POi2>\\(~C-i.'c\\ Les mostres de sang capil-lar .estan constitufdes per barreges de sang de petits vases 8 sanguinis, i pot trobar-se diluida amb fluid intersticial i intracel·lular.
Les mostres dorina de 24 hares poden requerir I'fis de diferents tipus dadditius segons les 9 determinacions que bagin de fer-se.
10 L'ED~A-~3, F~dditiu d'eleecio quan es yo1. Dbte~jruIla mama de serum 'per a 1a determinacio d/anticosscs enfront de certs agents infecciosos '-WR. 'reN'C.'5C'f"'~\ .
11 Desde e1 rnomento en que se genera una petici6n de una analitica bioquimica, la fase preanalitica debe conternplar como unicos elementos primordiales el transporte de Ias muestras y la correcta identificacion de Ios pacientes ,'h\\~ t'e rC\\bi0-, <..z:,\'&-'I\A;:J,;':,'f\ .J(.\>"':".
El manual de procedimiento de recogida y manipulaci6n de Ias muestras es un documento 12 tecnico a ser tenido en cuenta en 10s laboratorios perifericos y que en riingtin caso debe dar a conocer e1nombre del personal que 10 ha elaborado .
13 En 10s pacientes ambulatories 0 de consultas externas se debe solicitar obligatoriamente 1a identificaci6n 21 paciente y contrastar can la peticion solo en las peticiones del1aboratorio de urgenciaS -14 La trazabilidad y la documentacion de las muestras durante el transporte hasta el laboratorio receptor deben contemplar (entre otros parametres); -Agitacion (soportes) -Exposicion ala luz -Orientacion del recipiente primario El diagrama de flujo para Ia .clasificacion de sustancias infecciosas y muestras de pacientes 15 elaborado por el Cornite de Experto de las N aciones Unidas es ,un algoritmo adecuado si queremos aplicar la normativa tecnica respecto a1 transporte mediante biocontenedores homologados I v 16 17 e~ P~r calcular Ia sensibilitat d'una maguitud biologica el dia ostic d' .
disposar dels seus valors en una mostra de pobl ., :D t ~ pi gn una rnalaltia, cal Amb una distrih ., d ·G' acro a ec a a er aquesta malaltia \'Wl-~ V 1 n UClQ e auss I'interval d fere .
de 1a pob1p.ci6 , " , e re erencia compren entre els seus limits al 95% t=' V F ~ y $V l= \j V l= \- != \/ '\} V V 1 \j Per fer eItcribratg~d'una rnalaltia cal prioritzar lafensibilitat'€D detriment d I' , if .
,e espec icrtat 19 L'exactitud d' V El . una rnesura express a 1a c;iispersi6 dels valors gue li podrien correspondr l ~..
20 valor predictiu d' . db' . ..
e (»Q,;(fJ f= una magmtu 1Ologlca depen de la gravetat de la malaltia estudiada ~f\\.~ ~, 21 EJ control extern de la qualitat serveix per estirnar Ja precisio d' di ) La " .
....
..
un proce irnent de mesura 72 F ~ Q vanablhtat biologica depen del procediment analitic <.n'et.L-\.c,,;,C3 1.1 (\Ub'""llic ~'\ 23 F uan augmenta Ia precisio baixa I' exactirud i a I'inr ve ,_.,' -'-~ Jl=) e es \.y,\:) id(.\!~\.;Ji'C,(\cD \ 24 Ell'.
F P c~n~~ m:ern de Ja qualitar serveix per r acceptacio 0 rehuig de les series anaJftiques 25 V er er -ava uacio externa de la quaIitat cal tenir en compte eJ metode analitic emprat 1J V .3- Centre d'Estudis ATP ©® n[jallslS Lliniques i Diagnostic de Laboratori 26j Es reco~anabJe eVaCUaClO percnoiobligatori que cada laboratori disposi d'un pla dernergencia 1 F 27\ En ~na et,i~ueta les frases S 5ndlquen n~6~,,~e,~Jl~cifi~s ~eI producte derivat de la seva 1.manipulacio ",."1l;"-uuc, ,,12..--(,'>.\3::") I 281 Els agents ,biol?gics (bacteris, virus, fangs, parasits) es classifiquen en 4 grups de rise segons IV Ja seva perillositat I 29 Els laboratoris de practiques de la universitat 0 de centres on es manipulen soques 110 patogenes son exernples de laboraioris de nivell de contencio I \j 30 Un rnicroorganisrne que forma part de la biota normalmai es eI responsable de una rnalaltia infecciosa ;::c.oc:,~,\\ (.~~c.(\·e.:(-':ci.Fi'l>E:\ i= 31 Los residues sanitarios incll.lid. cs en el grupo 1 son aquellos asirnilables a urban os y no 1 \j plarrtean problemas especiales en su gestion 32 En el ambito asistencial, 1a ley de protecci6n de datos de caracter personal garantiza la C-confidencialidad de 105 datos demozraficos y analiticos de 105 pacientes 'v; .
v 33 La lIN"E-EN lSO 151&9 es una norma general de obligado cumplirniento en el sector industrial incluyendo la 'industria farmaceutica f 34 En un inforrne analitico, 10s limites de referencia de las magnitudes biologicas analizadas r nunca se han de indicar a continuacion del resultado r 35 Un inforrne analitico debe de incluir todos 105 elementos identificativos necesarios y ser 10 suficienternente Claro para suministrar sin ninguna ambigiiedad la informacion obtenida V •~ acerca de un paciente 36 La deterrninacio del peptid C perrnet rnesurar valorarla insulina ~ que s'adrninistren •.•• eJ malalts jaque no depen de Ia sintesi endozena dinsulina i....<:C,c(c,e;,;·~~=~f'\"2':':;'::; 37 El test de O'SulriV:ill es la prova oral de tolerancia ala glucose que s;utiJitza en el cribatgo (screening) de la diabetes gestacional i s'ha de realitzar a totes les dones ernbarassades V independentrnent de I'edat, 'Pes i historia medk~ .
concentracio d'hemogl~b1na glicosilada es. un bon indicador de 1a glucemia dels darrers 2 dies . '..
39 Colesterol total i colesterol-Vl.Dl..constitoeixen el perfil lipidic basic CC\.;\C\ell. ~'J\-c\L( rE;\ 40' Els valors de triglicerids son utilitzats en la formula de Friedewal pel calcul del colesterol 381 ~ to411 LLL ..
Tant Ja determinacio de colesterol corn de trizlicerids finalitzen amb una colorimetria on es 1 ~ quarrtifica l'aizua oxizenada alliberada Per una peroxidasa 1-'1"_', T(-; --=- NAi0i'( f) l.
42 Les VLDL ha,n desaparegut del plasma des pres d\m d~t1 de -12 hores \, ('(..ctEc;cq ,;:-.,cc.,,) F 43 Per a I'avaluacio del fisc relatiu de parir un infart de miocardi es tenen en compte els valors de BDL. A rnenor nivell de colesterol-Hlfl, rnenor rise ): I La classificacio fenotipica de Ies dislipidemies, en "que s'observa I'aspecte de] serum . posterior a un repos a 4"c:: i Ia ~O?..
mtat_ electrofor~.
ens perrnet avaluar les anormalitats _F . 41 r t441 ~®L 451 L"lCrem~nt:>d~ biljrru~lpa - .
c?~jugada, f{)~~atasa alcalina elevada en serum i ferntes amb poc color son indicadors d'ictericia post-hepat1ca -.
..
4 ..
"'-'.4 r""i\; ;),U"" hs ' Oa)cn?\( J to» -'~-PLS~ 2 C de I'ac\.J Ii" L SO 0,0/-) CD-c...<\Yl~ ae,~3.
o...\:&.:12.h:::,.....{ ~ t.
G'e-i-ca.~ ( ( "- J [D';QB~T\S TfF\)S '2• (!S' \c.
'1"" ~v&\...r •.. S\ n::s.c 'iT 'v os;:..o ~ ~y' ~6 , -t\9.
~J\.
eArn\:) j O-d.Jl+s \ ledG"t ,-., n.:--.. 'I-\.
'--'" " L.J t~ E:,U...
0·.-:;) -';) (-:;. wQo."Lt,s) , b ~ \:::t::?-2~-bt --L eO S-e.der\ tc.f\ \J rn.Q ':1::,1n'a - - -...;-" ~y \f\ nrvQ\rQ ><.: ? D~ '-....h (..,,()..,.y.oJ~ .-dJ...sJ c. ~ '.,. .~~<b ..(....-LAp<...lc-i rV 1<J.>(JI "t--2.
rc....
t: TestACDL /I-i:::>;;q~ Centre d'Estudis ATP ©® Eritrocits @G~~I4.
s.~N"'ll~ ,..-~- Dels elements formes de la sang els iinics que tenen tots els atributs per a esser considerats com a c~i'lules ~uientiques son els leuc6cits;~ 2.
L'hemoglobina corpuscular mitjana es el quocient entre'la concentracio d'hemoglobina en sang i el nombre d'eritrocits.
3.
La hipercromia es defineix con I'augment del nombre d'eritrocits, (~~~~1:::::1) 1t- -.--II-L-a-c"""la'-s-s-ifi-l-ca-c-io"-'-m-o-rf-o-lo-g-j-ca-d~e~le-"'s"--an-e-'m-ie-s~r'::'eq~u'::'e~r-e-ix-u':"n-a-o-b-se-rv~a-=Cl=-·6-d-~-,4-+~,e:::::;,p:"", 4 sang.
i'~' "'-';:,(JAf,j~, i La microcitosi reflecteix una disrninucio de la sintesi d'hemoglobina.
ii~,,: ..)~';~;t f v v ~~o, I :,':~L~H~t1.
~~5.
i ~~ , f'~~v." 6.
El metode de referencia.per rnesurar la concentraci6 d~hemoglobina",'~iii~~ng, es el de la I '.W::tlAnoy-cj;l'-f-· ~-l-..::cl::·a~·:n~o~m~e~ta~h:!:e~m~o~)g:cll~ob~i~n~a.:...'...:.~_" -:'_\__ ·'_':.'~...::t~~~-:.../ ~::;V;:::=*.i{l'1I{Ac(i~i < , 7.
Un volum corpuscular mitja de 90 fL es caracteristic d'una rnacrocijpsi normocitica.
,.rF l•.•••rJc(/I'D(:~i ¥I , 8.
La !i:e9Culocitosi es un,f~.gnlent~iie la poblaci6 diefIn-oats )ove'olrcul~.Il:t~J{'ji~t1~)' \/' t'tt(AGU~;~ ~9~.~~E~I-=c.::.o~~~r.::.v.:..e~r.::.m.::.e.:..l~1.::.d.::.e.::.1'.::.h.::.e=m=o~g~lo=b=i~n~a.::.e.::.s.::.d~e~gu~t.::.a~l£g.:..ru~p~h.::.e=m=o~' __-- "' '~i,~f_._' -+_~~~ ! 'vc,d" 5'J{' .(.-l " I 100.1;-- ~::j;::; i(He J h..if'J'-O/l'" •• , L. "";'/1' f--=-10.:..::....
+-A_l'_a_n_em_i_a_h_i _h_a_s_em-.!.p.::.r_e_d.::.is::::.m=in~u~c_io.:..' _d.::.e.:..l .:..n.::.o:..:,m.:..b.::.r:..:e.::.d.:..' e~r_i_tr....:o_c~its_.
11.
La concentraci6 d'hemogIobina en sang es mesura generalmgnt colorimetries: tl/ r 1 2 ,....
13 ;;~, ....c- Sempre que hi ha anemia (VCM) dels eritrocits.
'.I 19.
amb EDTA. ,F"1~>'7.,."" EI megflsari6'2!~;~,{flna -Dlaouetes~'~~~f;'> 31.
32.
33.
I :'" :l~f\/\'!h )Jllt01" \/" la sang es troba anticoagulada -r i v V les V 'Els reticulocits es tenyeixen per Ia tecnica de May-Grunwald Giemsa. G.~~ - ~;.<, Qua1sevol anticoagulant es idoni per explorar la coagulacio "in vitro".
Un reticulocit es un eritrocit jove que conte ribosomes, els quals-es poden visualitzar amb una tincio 'vital com es el blau de cresil brillant.
+-::t cel-lula gegant amb el nucli polilobulat ' ACDL 1 D.11'(i~8\\:) (C.~{':J(S) ~ mitja qy.e es Ii precursorajde ',' _ tap.•..
35, .~ 37.
38.
a la deteccio de reticulocits, F C. uJ."J'CS 5J) i:: r i ' ' i ! \./ Elf .cIr,epclu0dtS1Jhematies amb forma de faI~ son caracteristics de 1a f3-talassemia. Q E~,!puntejafb~sofil es veu ~a la intoxicaci6 cronica per plom (saturnisrne).
ttt~xtracciQitl.e"sangconyendonaI jresenta .m-es·~Y~ultatges qyeersfstema~d1'oui1i! E1S;ri!bt:"arnb el rrfalvac'ontenen EDTA C;~ a anticoagulant.' -- ..
Lu: ~{Y( I(3'11 / c9rpuscular I P)v 'e'tr~~J,<'l'superior ,''/, ferropenica, ~lr, 'ci"'8:1.;",'inucio del velum ~ C~h'\" 30. ''Eiiiilrnan"tmi,!"-arr~g~nerativa , es La megaloblastosi es l'expresslo periferic;;£,"~ ..,,, acrocitosi.
' La presencia de pleocariocits (neuty:0fils'1ffIT~,.t§egmentats .
de mid a granja sang periferica, es propia d'una carencia de factOI;~'m'agurai.i\Is. ~ ..
20.
cit-C, t'P-< de a la del metode automatic. t~~ID(/1 ' ,.....\10tn(.
.'~ La cone normal d'Hb en sang ales dones ha d'esser;superior a 130 gjL. C\Ra) Un metode automatic pel recornpte de cel-luIes !:l.' s es la impedancia electriea.
La ferropenia Cljrsa sempre amb anemia micrq~~\Q 15.
16.
17., 18.
-.f? , de 1 extensro ,;";".;::-",,-,;;:',, "-----~-:__---_t---t ,;<;;, y\(I.!c ~ V metodes c,~.x.~ L'augm:nt ~~: ~~~~r:,,~~~~~tiCUIOCi~}~~iC: regen~~~l'I:;:Si~~.
Gl~~~!1enta9~ (iIagno~cj d'tinqr-a_ll~I¥~~equerelx{~~~~rfOl0gl(S .IV.' Wh{,I(,~r'l1-o-· ~-+~ ..;,:;,!,.,;'-::--:--.,----------:---------:O"';'i'§, .~a(r,Vt,j.;l 14.
La fiabilitat del recornpte manual de reticuloci~ jO"Jet +-F"--'-, --1 -"i;;}'-t/.:..' utilitzant V Centre d'Estudis ATP <J® Centre d'Estudis ATP ©® Test ACDL 39.
40.
41.
Els dacriocits son eritrocits amb forma de llagrima, Els esferocits son eritrocits de forma esferica que es veuen en untrastorn hereditari de la membrana eritrocitaria.' ' L'alteraci6 de 2 a de Ies 3 series de l'hemograma indica que l'alteracio que ho provoca es ti us erifenc.
.l ' ~.
' ,(r~(Q, v v Leucos 42.
I.' ~ \.., La segn:entacio del nucli dels polimorfonuclears neutrofils normals oscJbla en'~;~0t,res i uatre lobuls.
-_ f 43. L'anornalia de Pelger-Huet es un trastorn hereditari dels polimorfonucJja :U:~hlE'9filsque dona hi ose entaclo dels nuclis d'a uestes cel-Iules.
¢,"'~W' 44. En el recompte leucodtari, el valor relatiu pels monocits es de 3-10.S{Q,L.
45., Un pleocariocit es un polirnorfonuclear neutrofil de mida '!;;;'~W';;i;; el nucli hi erse rnentat.
': La relacio serie granulocftica/serie verrnella en la M.D.es d'lJ:3.
\{ EI valor absolut del recornpte de linfocits es de 2,5-7,5'109 / L. ~'{)\) " L'EDTA modifica.la morfologia cel-lular i per tant noespot utilit~ per a la formula '1' ~,3~ __~I_e_u_co_c_f_ti_c_a_.
" "& ~ O. ~ 49.
50.
,~ ~ ~~ EIsgranulocits-eosip.ofils tenen un paper en la defen La desviacio a la dreta de la formula leucocitica es z Parlem de leucocitosi si es detecten valors inferio v .> 'f v'" V r ~ 'V" f= '=F l]~~=-~-~~~ •••...•......
v- u ::s '"F \-/ c-: PIa 60.
61.
62.
63.
Metodes d'e~tudi e 64.
65.
66.
v 67.
68.
69.
Test ACDL de marcadors 2 de v Centre d'EstudisATP ©® Centre d'Estudis ATP ©® Test ACDL Immunolo ia 102.
La.nefelometriapermet la deteccio d'irnmunoglobulines en serum per un,i6 a"antfg~nsi i mesura de I'angle de desviacilfaeJa"radi~ci6 uittave~sa la dissoluao. "~".,".:., •~",:~" 103. La -imimlnofhiorescencia '-~s'ra"rtecnica d'eleccio en la deteccio de" malalties autoimmunes.
La proteina del sistema del complement' que es mesura habitualment es C ,~" En cas.de.sospita d'angioedema hereditari es determina la proteina (1 II'lJL En totes les patologies hematiques, les proteines del sistema del cOII{)~ment "es n disminuides. <:0 i~c...:..'C)n<:=- ~ "t /./., " La deteccio d'immunoglobulines es essericial en infeccions continuades is' acients amb mielomes i mala1ties mielo roliferatives..
...
avaluar el progres que "+ v La presencia d'IgM elevades en un analisi immunologic indica infecd6j'irirllaria.
menor V 1 en v del SIDA i la v associaci6 de rise ambde La immunofluorescencia ob' ediva.
_-=tF';--_--"---'-'==-r="'--'--''-''''-''''--+--+=-_--l La quantificacio d.~.
V immunodeficient;;'*" ~------------~~~~~----~--~---------------+--~ E1 nombre d utilitzat com . La citome~'i...
flux permet realitzar aSJ,ajos in vitro per avaluar la funcional" ~ '~'~~l?limfocits.
~ -\~ ce-t\.J\z:s -..c ~<::::l r\ c-~<..L.: d~ d La. dete'-' . .
lmfocits BiT es fa errfuncio dels seu niarcadof de: membrana: .
~ .
, .ctl"9 N ~~'sfndr9me d'Hiper IgM esta causat peruna mutaci6 en el lligand de CD40 i es lltta~IDQlilltiaassociada al crornosorna X.
La"';g'f"fi'drome d'Hiper IgM es una patologia relacionada amb una deficient activacio dels Iimfocits.
Quan hi ha deficiencia de la produccio de limfocits B, els centres germinals dels fol·licles estan redurts 0 absents.
-===::.
TestACDL 4 Centre d'Estudis ATP ©® Test ACDL Centre d'Estudis ATP ©® v 70.
71.
72.
t.> V 73.
r 74.
V 75.
cq=..
76.
V 77.
~ 78.
V Hemostasia 79. Els rnetodes de Duke i d'Ivy, per a la realitzacio ~(lel.t sensibilitat, 80. El factor VII de 1acoagulaci6 es Vitarnina K depene 81. El calci ionic no es necessari per a l'activaci6 de la f 82. Els granuls alfa de les plaquetes contenen ADP icru de sagnia, ten en similar T v Test ACDL 3 Centre d'Estudis ATP ©® Test ACDL 132.
133.
134.
Centre d'Estudis ATP ©® La deficiencla de TAP produeix B com T.
( ~a \") una disminucio en la formacio tant de limfocits , La deficient producci6 de limfocits T es detecta al laboratori per un augment anorrnal de 1a producci6 d'aquest limfocits en tractaments in vitro amb agents mito ens.
En deficiencies de limfocits B, ja siguin primaries 0 secundaries, e~'fr~giient l'aparicio d'infeccions bacterianes extracel-lulars que' curs en aniij}f,l~~ions histolo . ues amb us.
·"'<~;~i!.:;i( 135.
Les deficiencies 136.
recurrents de micro or anismes intracel-lulars. ' La deficiencia de protemes del sistema del complement de limfocits T afavoreixen V ./, la proliferactP: 'J, 0 de macrofags r no resulten d'especlal gravetat degut a que son cornponeif~~~;19Jt~lw resposta 137.
138.
139.
immune innata.
L'expressi6 deficitaria deIs MHC pot produir patologies una deficiencia rimariaen la roduccio de limfocits T.
El sfndrorne de DiGeorge es degut a una deficiencia lirnfocits 'F er absencia con enita de timus.
Totes les .malalties disminu'ida,' ,,':' C immunologiques "\';f"''')~'' greus que ;,~ ertf'la rnaduracio dels .?:;:.
'V s6ndegt:tde§'\~'fl'0'yna e\e", "" "€X~' .r:,•• v/ o'r'.roes tant resposta , / immune,~ '<\~;6~"'\~' ~ Microhiologia Les infeccions 140.
141: 142.
143.
144.
145.
146.
147.
148.
149.
150.
151.
152.
153.
154.
155.
156.
nosocomials estan propiciades R~d~~Bfofaindfgena. ~ T EIs a~ents n:icrobian~ ~rodu;ixen sempre ~;fd¥itf~'~<s com a consequencia de la saturacio del sistema immunologic de I hoste. .
'r .• :,·~ .' L'aillament d'un microorganisme.en qualW~¥;gJ analisi microbiologic Indica sempre que es ,l'agent causal de la infeccio..".ili,:.
~i~4~i ' Son zones esterils: 1a sang, e1 tract.l'l:I.esptf,~(6)::i, els ronyons i l'oida interna.
La colonitzacio d'una zona est~tn 'q~l'01.g~nisme Indica un defecte en els sistemes de '~ 12 F defensa natural de l'individu.A1'.£Y~s"",P;::;·'·if c> Els laboratoris de microbiolpgia<cliJg!?~ es caracteritzen per l'amplia varietat de les rnostres cliniques que a:rrib(;!ri"i~er la~an diversitat de metodes diagnostics.
Quart arriba la mostra, all~bQ'tlltpriel primer que es fa es un antibiograma per coneixer la sensibilitat del microorgani:fi'1i~faQht als antimicrobians.
La informaci6 cIfnica del pa1:i'el1t1te menys rellevancia en un analisi microbiologic que en a1tres tipus d'analisi, <a"'''· , , v La presa '(f~ mostra tr~~'a~un analisi microbiologic es mes adequada d'haver inlciat el trCl.~:lii.E;fl~amb antibiotics.
Habitualment es 1}g£~ssitl."'3-4 mostres perun analisl microbiologic.
E? general so~, 'Tnd',f,~~jJesmostres obtingudes si es fa despres per puncio que les obtingudes .f: ~ r ~ rnitjancant V hlSOp.
~'~'_' ~--~----~~~----~~----~~~--~----_+~--~ EIs medis Sty,5!(\:~:iks i Cary-Blair son medis de cultiu per l'aillarnent dels bacteris.
~ £er a tots};l~jiitGt6organismes es adequat la seva conservacio en nevera fins a un maxim f: de 24h ... :~~:';W~~+:./ " Genera!;inFhtjJe~ mostres amb sospita de virus es poden congelar si s'han de transportar m;e'~'de '2'~hiB-';" .
~na mosp-'a, mal identificada 0 amb itransport inadequat no es pot analitzar de cap \ffianera. i{ , E:~'~(F~gpfuanafer una observacio microscopica de les mostres una vegada acceptades per des~~rtar la contaminacio de Ies mateixes.
En una mostra d'orina es recomana que sigui per micci6 espontania i es recul1la segona part de lei.rniccio, TestACDL 5 V t./ V V Centre d'Estudis ATP ©® l Centre d'Estudis ATP ©® Test ACDL 157: 158.
159.
160~ 161.
162.
~ Per a persones sondades es indiferent agafar les mostres d'orina de la bossa de recollida d'orina 0 del tub de sondat e.
Els volums de mostra d'orina han de ser superiors a 30 mL i els de femtes liquides su eriors a 25 mL.
Les mostres de femtes que es transporten durant un temps inferior a 2h necessiten un rnitia de trans ort ti us Ca -Blair, Les mostres d'esput es poden conservar un maxim de 24h en nevera i es co,,'~c mill or en un medi ade uat Stuart-Amies 0 similar.
La presa de mostres sanguinies en quantitat adequada es de 10-20 revia desinfecciodoble del bra on es ren la mostra.
En les mostres de sang sempre es realitza un hemocultiu per diagnosficar d'una infecci6 microbiolo lea, Per l'estudtrnlcrobtologtc de mostres sanguinles es fa servir EDTA;~Qm;9~ftHPcoagulant.
es un agent El polianetol sulfonat sodic (SPS) uan es realitza l'estudi de Neisseria 165.
'F- 166.
~~ l'~:~~~~:~s:~~!::.ang La gelatinainhibeix 169.
170.
171.
172.
"'l? I "?- "'"I:".
":'\j es fa nornes un estudi d'anaerobi:~: .- es Sbspita la presencia ~ l'efecte del SPS..OC:'l1' de LCR tenen una caducitat superior nevera ue Ies mostres d'orina.
Les mostres de fluids corporals necessiten':tjims conservaci6 ade uada de la mostra.
Les mostres de LCR, liquid pleural i lfquid ascfti tern s inferior a 2h.
Les mostres genitals s'han de sembrar al costa EI sistema Port- A-CuI Tube TM es un siste\lla~ Les mostres de biopsia es poden conse i'~;;' hores si s'addiciona formal.
(mS!l1Y~.temps ~1,*"i~ de conservacio] de transport ; ser analitzades mostres la =t: per \./" -=f de sang com per .
, I!""'" "? en un espai de '·"""la.pitde Petri esteril i poden ser conservades - .. ,-_, en ort per microorganismes anaerobis era durant un periode maxim de 24 tant per prendre 173.
174.
F ~r~' fungicida per inhibir ei;qielxement de fangs s .
167..r- Les mostres 168.
~ durant .
__ J.~ 175.
176.
177 ..
178.
179.
En un analisi microbiolo res onsable de la infecci6.
Eft ,cas de sospita de meningi . acteriana el medi de. cultiu rnes adient es agar sang 0 aarxoC:olata.,,~~ En un analisi micrd~tQ,!.2,liic d'orina qualsevol micrcorganisme aillat es considera res onsable de la iri~ccfif~l' EI principal agent't~.ilu>-salde las infeccions urinaries tant en el ambit hospltalari com extrahos ita! ;;<;:""'rtlferichia coli.
.
.
183.
aden conservar-se a temperatura ambient fins a un maxim de 24 hores si s'a .
acid boric com a conservant.
Per identi roorganismes responsables d'infeccions urinartes s'estudia nornes les plaques-arpb r s de 100 colonies 0 amb 10-100 colonies i presencia de leucocits i sint,pma\9fo ~.
~~presenirf;f~B.e cel-lules de descamaci6 vaginal en mostres d'orina es motiu de rebuig de mostra'~i ~¢i6 de microorganismes en mostres d'orina sempre s'interpreta com a positiu a 184, 185, 186.
EI tracte intestinal es la zona de l'organisme amb roes biota indigena de l'organisme.
La major part de microorganismes fntestinals s6n aerobis.
Els principals agents causals d'enteritis s6n E. coli i Staphylococcus aureus.
180.
181, 182.
f------J~ "I i~n recom te de ~'104UFC mL inde endentment del ti us de mostra.
6 Centre d Estudls A I P ©® Test ACDL 187.
188.
189.
190.
191.
192.
193.
194.
195.
196.
197.
198.
199.
200.
Centre d'Estudis ATP ©® E1medi caldo selenit cistina es un medi d'enriquiment per Salmonella.
Les mostres de femtes on es sospita la presencia de Shigella cal refrigerar-les el mes aviat possible.
L'exarnen microscopic de les femtes es de gran utilitat.
En una enteritis causada per Salmonella es obligatori fer sempre l'antibiograma.
E1 metode d'aglutinaci6 en latex permet la detecci6 d'anricossos del pa_deiit;.front al microorganisme causant de la patologia.':;}~~"""/ L'Epsilon Test permet Ia determinacio de la eML,:'> ''c;).;,,~ En el rnetode de diluci6 en medi lfquid, la CM!es calcula a partir de me;!:p.·q~s microscopies, L'E-test ® es un metode quantitatiu.
·{j,.·;"'~~~:E;!;'\c' L'antibiograma es un metode quantitatiu per a determinar la sensibilitat dels microorganismes front a determinats antibiotics.'·:;;~;:l?B;:';"; __._".
El metoda de difusi6 en agar names es iitil per microorganismes de';;~f~fxE!lIlentrapid.
Els antibiogrames estan totalment estandarditzats I hi ha bona corr~JaJci6 amb els valors quantitatiusde CMl.
yo" Al fer J'antibiograma s'incorporen microorganismes control.
4!;' L'analista en funci6 dels resultats de l'antibiograrna decideixf.'l~ltractament a aplicar al malalt, .
.;,;,.~ La utilitzaci6 de patronseslmprescindible en.toteSJffst~!'iJjJql:i.es;C!.nalftiques utilitzades en microbiologia clfnica aixi com el controi de puresad~kqujti'us,~ue es fan servir. .'.
Parasitologia ~"", ..' ' ~' tf-;~::_?}_/ 201. Les principals tecniques de fixacio de femtes son SAF~~JJ;:P!lOl i MIF.
202. La deteccio d'anticossos es considera unmetodel1!.Fg§fitd'analisi.
203. La fixaci6 de femtes amb formal 0 SAF i posfeI;io?"'tlnci6 amb hematoxicilina ~ --p '<f-~ ~ V r c>: ;f/ V V t..-/ ~ ~.
.
L F -'--;--'---' V ~ 0 Gomorri V 204. ~:~~:~x:a~~:il~e~:~~ ~':~~~::'er l'an~;~!;;~tozousen femtes.· . f 205. El metode difasic de Ritchie es up m:~~~~~1t, de concentraci6 que permet l'analisi de V protozous i larves d'helmints.
/}.«....:.jii- ..::..,/.
206. EI frons de sang ila tecnica de lagptl'W;llixyda: permet la deteccio de parasits en sang.
L/ ;['fJ7A Els metodes de concentraci6·(Fi'~Jl,; ..hgmolisis, separacio de Ia capa Ieucocitaria) V son d'arnplia aplicacio en la~ti~teccid~a~ Leishmaniosi i Tripanosomiasi.
208. La utilitzacio d,e COIOrat1t~' rescents permet la visualitzacio dels acids nucleics del parasit .
~------------------~--------------------~~~ 209. E1 xenodiagnostic es un m.
er detectar parasits en femtes.
210. La tecnica d'ELISA i la.i.wmunocromatografia permeten la deteccio d'anticossos en el malalt.· . . '. ·iI~.·:\!Y" ;, . .' ". ': .. ".,", . .
. ; v- ~ += -=+- 211. L'aglutinacio amb!~t~~i~p~~~rmet la detecci6 d'antigens de Leishmania en mostres d'orina.
/li~" 212. La deteccio d"?n;f:ico'$~pkes de gran utilitat per al diagnostic de filaries.
213. Per a detectadijltx:!:q!ssos sempre es fan servir antigens sencers.
214. E1 rnetode c;l;~~K'$,tg_ ..perrnet la deteccio d'ous d'helrnints en ferntes.
Test ACDL 7 , V -=F +" ~ Centre d'Estudis ATP ©® ·apendixs nuclears en forma de baqueta de tambor s6n llocs del neutrofil on es troba el nucleol i ~ un factor pronostic en la infecci6 vru: i necessitat i . anti-Vll-l tindre tan defectes als Iimfocits T com 75 BI 76 77 Tot 1.'aparell respiratori btiWfe;;.i~steril Una mostra d'exudat ~:~;:pof"?e'cbl1iramb un escobill6 esteril amb medi de transport adequat o per aspiracio ·/:]:t;f~7:, V 78 79 80 81 82 83 84 En . les meni~:fit,~;\.Xi!i~ues.son caract~ri~ics uns riiv~ll~' molt elevats de leucocits pohmorfonucle~;p:rotemes 1 zlucosa en liquid cefalorraquidi A ~'estudi~1<~J;t~q~i~ cefalo:ra~u!di {LCR) per possibilitat d'una infecci6 meningia.inomes es contempla-l' estiidi bacteriologic .
L~ .'thiijor'·~P?tC ~e l~s infeccioils. ~el, tracte .urin~ s6n de, tipus ascendent i els rmcroorgarusmes implicats son la propia biota del intesti Pei';(;onfirn;;rr si un patogen es el responsable d'una infeccio d'orina s'ba de realitzar un anl~di¢htehun rnedi selectiu i un recornpte : ' Per a l'aillament de Salmonella a partir d'una mostra de femta, s'utilitzen -medis denriquiment i medis selectius j diferencials com I' agar MaeConkey 0 XLD '.
En el nostre entom la major part de quadres enterics bacterians son eausats per Salmonella 0 Campylobocter I...--:; I-t' -=--C.
1 V V V .l/ f..
85 86 87.
88 89 La CMI es la concentracio microorzanisme El resultat d'un antibiograma .sensibles 0 hi ersensibles maxima permet d'antibiotic classificar que inhibeix el creixement als rnicroorganismes com t~slS'tents, Per detectar anticossos anti vm s'usen tecni ues d'enzimoinmunoassaiz Per a una bonainterpretacio deIs analisis microbiologies es irnprescindibld normal del.cos·huma, ,-' 90 91 9i 93 94 95 96 El frotis de sang i la gota gruixuda .amb coloracio Giemsa permeti.t;!.;le .
'1'" .
arasitosis hemati ues ''t'!'>'' com L~s t~cni~~es biIasiq~es, La tecnicfi ,de Ritchie, po en. ,~,. emrades pe~ a la visualitzacio de trofozoits de rotozous c.. V\\..rQ,OC):S , _ i}\()iM ~'\.VM La fixaci6 de ferntes en WF permet la coloracio de les formes parasi ' ies i I'observacio directa al microsco i ,_, L' observacio deprotozous en femta implica sempr ..-~" i6 de la mostra abans de ;..,.1fixar-la amb formol 97 la peR poden ser una eina 98 99 I 100 La determinacio d'anticossos 'I dificil de dur a terme Els cultiuss'utilitzen antiparasitaris ,' en Parasitolo •a la sensibilitat del dia ostic ...