TEMA 2. MICROSCOPIA EL·LECTRÒNICA (2014)

Apunte Español
Universidad Universidad Autónoma de Barcelona (UAB)
Grado Biología - 1º curso
Asignatura Biología Celular
Año del apunte 2014
Páginas 2
Fecha de subida 02/11/2014
Descargas 54
Subido por

Descripción

Apuntes realizados con el docente Lleonard Barrios.

Vista previa del texto

BIOLOGIA CEL·LULAR Tania Mesa González 1º CURS BIOLOGIA UAB TEMA 2: Microscòpia el·lectrònica.
M.E de transmissió: En comptes dels fotos de llum utilitza electrons.
- Hi ha un filament de tungstè que al escalfar-se comença a emetre electrons, per un tub.
- Els electrons travessen la mostra (queden enfocats per una lent) i altres es queden allà atrapats. Al incidir, els electrons donen una imatge a la placa.
- Actualment les imatges són digitalitzades.
- Ens permet veure elements que estan separats fins a 2nm amb més claredat. (ultraestructures)  - La seva obertura numèrica màxima és de 0.001.
- Tenen millors resolució gràcies a la λ dels electrons.
- El suport que la mostra sol utilitzar és un reixeta de coure.
D< = + Resolució Tractament de les mostres: Hem d’obtenir làmines molt primes.
1. Fixar la mostra per conservar estructures (gluteraldehid o Tetraòxid de osmi) 2. Deshidratació 3. Inclusió  posar la mostra en una resina en estat líquid, el posem en un motlle i el fiquem al forn.
(òxid de propilè) 4. Tall  Aquí per tallar s’utilitza un ultramicròtom, amb les ganivetes de vidre o diamant, i fa seccions molt primes (de 100nm aprox.).
Una vegada tallades (seriats), es dipositen les seccions sobre una superfície d’aigua per a mantenirho estirat. Col·loquen les mostres a la reixeta.
5. Tinció  amb sals de metalls pesants, que s’enllacen a membranes concretes . (Sals d’urani per les proteïnes / Sals de plom i osmi per els lípids (membranes)) Tècniques microscòpia  Contrast amb anticossos: S’uneix a l’anticòs un metall pesant (normalment OR). Llavors aquest s’enganxa a alguns orgànuls a causa de les proteïnes de membrana.
 Criomiscroscòpia electrònica: Es submergeix la reixeta en l’aigua i es congela immediatament, i s’observa la mostra congelada. La imatge s’obté amb un fons uniforme i la imatge bé (s’obté sobretot en virus).
BIOLOGIA CEL·LULAR Tania Mesa González 1º CURS BIOLOGIA  UAB Tinció negativa: Submergir la reixeta (però no la mostra) en una dissolució de sals de metalls pesants.
Els electrons no passaran on hi hagi metalls, només per on hi ha la mostra sense cobrir.
 Ombrejat: Recobrim la mostra amb metalls pesants de forma obliqua. S’obté una espècie de motlle de la mostra en el metall (rèplica).
 Criofactura i gravat per congelació: La mostra es congela i una màquina colpeja la mostra. S’ha vist que un “punt dèbil” de trencament entre la doble membrana, el que permet observar la mostra mes a fons, de manera més detallada. També ombrejat i replicació. Rèplica observada al microscopi feta de metall i carboni.
M. E. de rastreig/scanning (MES): També utilitza electrons. Es recobreix la mostra també amb metalls pesants (or o pal·ladi), però aquesta vegada la mostra queda exposada de manera perpendicular. Les mostres han d’estar mortes. Els sistemes per recollir les mostres són l’ombrejat (rastreig/escombrat). Les imatges que s’obtenen permeten reconstruir imatges d’una gran definició(superfícies). A més, la imatge obtinguda sol ser la reproducció de la mostra en el metall, ja que en alguns casos fins i tot la mostra es dissol.
...