Técnicas microscópicas (2013)

Apunte Español
Universidad Universidad Autónoma de Barcelona (UAB)
Grado Genética - 1º curso
Asignatura Microbiología
Año del apunte 2013
Páginas 3
Fecha de subida 21/10/2014
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– TÉCNICAS MICROSCÓPICAS – 1. Generalidades de microscopía 1.1. TAMAÑO APROXIMADO DE LOS MICROORGANISMOS 1.2. PRINCIPALES MORFOLOGÍAS CELULARES DE PROCARIOTAS 1.3. CONCEPTO DE MICROSCOPIO Y PROPIEDADES BÁSICAS Microscopio: herramienta básica en el campo de la microbiología ya que permite observar a los microorganismos gracias a su capacidad de aumentar el tamaño. Propiedades: a. Aumento: capacidad de aumento de las lentes. Depende de los objetivos y el ocular.
b. Resolución: capacidad de observación de dos puntos como unidades diferentes.
Depende de la captación de la luz por parte de la lente.
1 2. Tipos de microscopía óptica 2.1. MICROSCOPÍA ÓPTICA DE CAMPO CLARO – – – Observación de: morfología, agrupaciones celulares, estructuras y tamaño.
Tipos de muestras: a) preparaciones in vivo o frescas (se aprecian mejor los aumentos aunque están limitadas por el bajo contraste) y b) teñidas con colorantes básicos (con carga positiva).
Ejemplos de preparaciones con microscopía de campo claro o Tinción de Gram: primero se aplica una tinción primaria con cristal violeta y mordiente (solución de yodo). A continuación, se decolora con etanol.
Finalmente se realiza una tinción de contraste con safranina alcohólica.
o Tinción de Ziehl–Nieelsen: basada en la presencia de ácidos micólicos en envolturas de micobacterias (responsables de la lepra y la tuberculosis).
o Tinción de cápsulas: mediante tinción negativa (resalta la cápsula bacteriana mediante la tinción del resto de la muestra con tinta china).
2.2. MICROSCOPÍA ÓPTICA DE CONTRASTE DE FASE – – – Observación de: estructuras internas de las células, movimientos y recuentos.
Características de la imagen: células rodeadas por un halo luminoso.
No se utilizan tinciones en el contraste de fase.
2.3. MICROSCOPÍA ÓPTICA DE CAMPO OSCURO – – Observación de: estructuras externas de las células (flagelos), movimientos y recuentos.
Características de la imagen: poder de resolución muy elevado; las células se observan como una imagen brillante contra un fondo oscuro (mayor contraste bacteria–medio).
2 2.4. MICROSCOPÍA ÓPTICA DE FLUORESCENCIA – – Observación de: morfología, agrupaciones celulares, tamaño y movimientos.
Tipos de muestras: a) organismos autofluorescentes (usualmente), b) teñidas con fluorocromos (ex. rodamina B) y c) teñidas con anticuerpos fluorescentes (inmunofluorescencia, utilizada para diagnósticos y recuentos).
3. Tipos de microscopía electrónica 3.1. MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE BARRIDO (SEM) – – Observación de: superficies celulares, recuentos microbianos y partículas víricas. No aplicable al interior celular.
Aumento: X10.000 3.2. MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE TRANSMISIÓN (TEM) – – Observación de: interior celular (ultraestructura) y virus.
Aumento: X200.000 MICROSCOPÍA EN TRES DIMENSIONES: MICROSCOPÍA CONFOCAL (CSLM) Mediante un láser, se obtiene una imagen digitalizada que más adelante, utilizando un software de procesamiento de imágenes, se puede modificar para su estudio (tinciones con colorantes fluorescentes, imágenes a color falsas…).
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