tema 6 (1) (2017)

Apunte Español
Universidad Universidad Santiago de Compostela
Grado Biología - 4º curso
Asignatura evolución humana y diversidad molecular
Año del apunte 2017
Páginas 4
Fecha de subida 26/06/2017
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APLICACIÓN DE LOS MARCADORES GENÉTICO MOLECULRES EN EL CAMPO DE LA CRIMINALÍSTICA Análisis del perfil genético molecular de cada individuo, variabilidad interespecífico Actúa en el campo de los delitos contra la libertad de las personas, contra la libertad sexual, integridad física, identificación de los restos humanos Cada individuo presenta un perfil individual único, que es una característica fundamental que hay que tener en cuenta y que responde al principio de las especie humana presenta una variabilidad intraespecífica no solo en anatomia sino también en la secuencia genómica PRINCIPIO TEÓRICO Los marcadores genético moleculares presentan una estabilidad en la expresión fenotípica a lo largo de la vida del individuo. La expresión de ese MGM se mantiene intacta a lo largo de la vida del individuo. No podríamos hacer análisis si la expresión del MGM cambiase Podemos aplicar los MGM porque la adscripción genotípica es inequívoca.
No nos interesan MGM que presentan relaciones de dominancia/recesividad porque no permite distinguir homocigotos de heterocigotos VESTIGIOS BIOLÓGICOS Un vestigio biológico es cualquier elemento biológico que permita obtener una información precisa del perfil molecular del individuo. Deberá tener células nucleadas para que pueda tener DNA, por ejemplo sangre total, saliva, esperma, cabello (tanto en la raíz como en la médula del cabello), uñas… una amplia variedad de vestigios que nos permitan obtener células completas Los vestigios biológicos son el punto clave para poder realizar el análisis genético molecular Erosión epidérmica es una de las primeras cosas que se ve en los estrangulamientos. En las uñas de la víctima aparecen estas erosiones epidérmicas lo que nos puede llevar a la identificación del autor Lo que se hace es establecer un perfil molecular. El perfil molecular que establecemos de la muestra biológica es un perfil molecular que va a ser el punto clave a la hora de efectuar todo el peritaje. Esta validación requiere dos aspectos básicos - Cadena de custodia. Tenemos que asegurarnos que llega esa muestra y no otra.
proceso de recogida, almacenamiento, transporte…. Es una cuestión clave porque cualquier alteración o ausencia de garantía tiene consecuencias. Al laboratorio puede TEMA 6: APLICACIÓN DE LOS MARCADORES GENÉTICO MOLECULRES EN EL CAMPO DE LA CRIMINALÍSTICA 1 - llegar otro vestigio diferente del que tenía que llegar. El juez tiene que tener una garantía absoluta de que se han mantenido las garantías de la cadena de custodia Batería de marcadores genético moleculares. El fiscal establece que el individuo X ha cometido un delito y tiene el apoyo del estado para tramitar un proceso jurídico. Esta batería de MGM va a dar un perfil. Para que sea válida requiere que eses MGM sean válidos para este tipo de análisis, por lo tanto tiene que estar validados (reconocidos por la comunidad especialista en este tema). Necesitamos aplicar MGM que ofrezcan garantías necesarias para establecer un perfil individual inequívoco y por la posibilidad de contrastación (contraperitaje). El contraperitaje es una cuestión clave en la defensa del individuo y solo es posible si en la validadción estamos utilizando una batería de MGM: o Estables y fiables o Estandarizados por todos los laboratorios del mundo: para que pueda ser contrastado por cualquier laboratorio A la hora de establecer un perfil existen baterías de MGM que están reconocido por la estandarización y por ser universal La validación es una cuestión básica e importante La identidad del análisis del perfil molecular se basa en que si yo tengo de un vestigio biológico el fenotipo F1 F2 F3 F4, y tengo diferentes encausados que pueden ser sospechosos. Lo que se establece es la coincidencia de los fenotipos moleculares correspondientes. Esto indica que la probabilidad va a determinar la exculpación (incompatibilidad) o la encausación (compatibilidad completa en cada uno de todos los fenotipos que componen el perfil molecular) El hecho de que el individuo coincida no es una causa suficiente para acusarlo. En la medida que tengamos un número mayor de marcadores tendremos un perfil biológico más preciso.
También depende de la combinación de las frecuencias de los marcadores. La probabilidad de coincidencia será el producto de que coincida cada marcador (mirar diapo) La probabilidad de coincidencia (de que el material genético presente en la muestra realmente proceda de un individuo) es igual al producto de las frecuencias de los marcadores analizados (deberán ser fenotipos con una baja frecuencia para permitir que excluyan a gran parte de los individuos de la población). La probabilidad de excluir correctamente a un individuo que pertenezca a la población a partir de los datos obtenidos con los análisis de los marcadores es la Probabilidad de exclusión = 1- probabilidad de coincidencia La compatibilidad genotípica no quiere decir la culpabilidad, depende de la probabilidad La probabilidad de la coincidencia al azar corresponde a la probabilidad de que un individuo seleccionado al azar, coincida con el perfil genético del vestigio. No implica la acusación, depende de la probabilidad. La probabilidad exige la probabilidad de que incida la probabilidad de todos los fenotipos simultáneamente. A la hora de establecer el perfil de una víctima no se puede establecer una batería pequeña de marcadores, porque a medida que aumenta el TEMA 6: APLICACIÓN DE LOS MARCADORES GENÉTICO MOLECULRES EN EL CAMPO DE LA CRIMINALÍSTICA 2 número de marcadores, aumenta la incompatibilidad de primer orden, que hace incompatible el fenotipo del individuo con el del vestigio 𝑃𝑟𝑜𝑏𝑎𝑏𝑖𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑖𝑛𝑐𝑖𝑑𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 = ∏ 𝑓𝑟𝑒𝑐𝑢𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑓𝑒𝑛𝑜𝑡í𝑝𝑖𝑐𝑎 La probabilidad de coincidencia es la probabilidad de que un individuo seleccionado al azar de entre la población coincida con el perfil genotípico del culpable.
Necesitamos incluir una batería muy amplia de marcadores para tener un error muy bajo para encausar falsamente a un individuo. El error de encausar falsamente a un individuo es la probabilidad de coincidencia. La probabilidad de coincidencia nos está indicando que un individuo seleccionado al azar será acusado falsamente, por lo tanto tiene que ser baja y esto se consigue a medida que aumenta el número de marcadores analizados.
A la hora de aportar este tipo de pruebas tiene que haber una validación, con un número bajo de MGM es poco sólido por eso exige aplicar una batería amplia y marcadores que tengamos una garantía que responden a los requisitos que tiene que tener para poder ser utilizados en estos estudios. Tiene que satisfacer condiciones de validación CRITERIOS DE SELECCIÓN No todos los marcadores genéticos tienen el mismo interés para este tipo de estudios. En los análisis de criminalística, identificación de restos humanos… la batería que se utilizan preferentemente son los STR. No se utilizan los SNPs por el grado de polimorfismo genético, va a presentar dos opciones alélicas (puede alcanzar una heterocigosidad como máximo de 0.5).
sin embargo cuando utilizamos STR estamos hablando de un marcador multialélico y la heterocigosidad es más elevada, donde el número de clases fenotípicas se multiplica.
Encontramos que cuando hablamos de STR el número de clases fenotípicas que encontramos en el vestigio biológico es muy superior porque corresponde a marcadores multialélicos; aumenta enormemente el poder informativo. Es más difícil la probabilidad de coincidencia cuando hay una batería más amplia de clases fenotípicas.
Los STR van a ser los más adecuados porque de principio presentan una batería más amplia de clases fenotípicas lo que disminuye la probabilidad de coincidencia al azar.
Se suelen utilizar 16 STR que están validados en estabilidad y son comunes, es decir que puedan utilizar diferentes laboratorios - El polimorfismo elevado de debe ser un polimorfismo equilibrado en las frecuencias alélicas. Cuando hay un excesivo número de clases menores de p< 0.05 el error típico asociado va incrementándose gradualmente. Si se tiene un error en la estima de las frecuencias implicará una fuerte distorsión en la probabilidad de coincidencia. Se va a ver cuantitativamente afectada TEMA 6: APLICACIÓN DE LOS MARCADORES GENÉTICO MOLECULRES EN EL CAMPO DE LA CRIMINALÍSTICA 3 - - - Los marcadores que tengo que seleccionar deben ofrecer una estabilidad y fiabilidad estadística Deben tener también una estabilidad somática, es decir, que no varíen dependiendo de la muestra que tenga. Misma expresión en los diferentes tipos Marcadores que presenten independencia cromosómica. Si hay fenómenos de ligamiento no se deben utilizar porque no serían sucesos independientes. Si se tratan como sucesos independientes debemos asegurarnos que estos sucesos son independientes y esto sucede si su expresión corresponde a una expresión independiente. Si hay fenómenos de ligamiento entre diferentes MGM la variabilidad del 1 va asociado a la variabilidad del 2 por lo tanto no son sucesos independientes. Es necesario que el MGM 1 y 2 no haya fenómenos de ligamiento.
Hitchicking: puede pasar desapercibido. Los STR que utilicemos no deben estar sometidos a este fenómeno Tamaño molecular: amplicón. Va a haber STR más largos y otros más cortos. Estamos hablando de vestigios biológicos y este contenido biológico está sometido a la putrefacción bacteriana. Si el amplicón que tengo para analizar en la PCR la putefracción bacteriana va a determinar la fragmentación del DNA, cada vez más pequeños que no pueden ser sometidos a técnicas de amplificación porque no hay moldes intactos para la amplificación por PCR. Cuando elegimos STRs con un tamaño de amplicón elevado, en muestras que están muy degradadas, no encontramos moléculas íntegras de amplicón, de manera que ese STR no tiene rendimiento amplificativo y ese STR no nos vale porque nos impide obtener moldes intactos y desarrollar una PCR.El tiempo va a determinar la fragmentación del DNA, esa fragmentación se debe a la actividad bacteriana que van a liberar endonucleasas que van a determinar la fragmentación hasta que carezcamos de moldes íntegros para PCR La degradación dependerá de la degradación bacteriana que está íntimamente relacionada con las condiciones ambientales que está sometida el vestigio biológico (temperatura, humedad y radiación UV). Una temperatura elevada y un grado de humedad alto implican una mayor degradación. Un tercer factor está en la radiacio´n UV, a mayor dosis la fragmentación del DNA se va a ir acelerando.
Muestras que estén muy deterioradas se utilizan miniSTR, que son STR pero con un tamaño de amplicón de 40-60 pbs. Cuando hablamos de muestras muy degradadas la selección recae en miniSTR Multiplex: una batería de STR que sean susceptibles de efectuar estrategias de coamplificación multiplex. El problema a solventar es que el DNA de partida es limitada. El multiplex es útil cuando estamos hablando de una muestra biológica de partida limitada DNA FINGERPRINTING Cada individuo de la población va a tener un perfil molecular específico, único e irrepetible.
Nakamura, a principios de los 80, es el punto de partida ya que fue quien tuvo el punto central de partida. Cuando efectuamos el análisis de RLFPs el perfil de lo que sería el análisis de los TEMA 6: APLICACIÓN DE LOS MARCADORES GENÉTICO MOLECULRES EN EL CAMPO DE LA CRIMINALÍSTICA 4 ...

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