Seminario 2.Determinación de proteínas (2014)

Apunte Español
Universidad Universidad Rovira y Virgili (URV)
Grado Biotecnología - 1º curso
Asignatura Bioquímica
Año del apunte 2014
Páginas 2
Fecha de subida 17/05/2014
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SEMINARIO 2: DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS 1. Concepto de proteínas.
Proteínas: moléculas formadas por cadenas lineales de aminoácidos.
Las características de cada proteína están descritas a lo largo de esta asignatura.
En resumen, se trata de moléculas diversas y muy versátiles, que forman diferentes estructuras que conllevan una función determinada.
2. Concepto de proteómica.
Proteómica: Es el estudio a gran escala de las proteínas, en particular de su estructura y su función.
Este estudio permite diagnosticar una enfermedad o pronosticar su evolución por medio de Biomarcadores, tal como hemos realizado en prácticas.
Proteoma: Mapa completo de las proteínas expresadas en un momento dado y bajo unas condiciones concretas.
3. Métodos de estudio.
Hay diferentes métodos de estudios, aunque se clasifican según sean: CUALITATIVOS: detección de proteínas.
SEMICUANTITATIVOS: métodos colorímetros o espectofotométricos.
CUANTITATIVOS: espectrometría de masas.
i) WESTER BLOT Técnica para determinar la proteína de muestras complejas. Indispensable hoy en día en el ámbito de la biología molecular y la biotecnología.
Mediante una electroforesis en gel se separan las proteínas atendiendo al criterio que se desee, hay casi tantas posibilidades como tipos de electroforesis existen. Luego son transferidas a una membrana adsorbente (típicamente de nitrocelulosa o de PVDF) para poder buscar la proteína de interés con anticuerpos específicos contra ella.1 2 Finalmente, se detecta la unión antígeno­anticuerpo por actividad enzimática, fluorescencia entre otros métodos. De esta forma se puede estudiar la presencia de la proteína en el extracto y analizar su cantidad relativa respecto a otras proteínas.
Se pueden separar las proteínas según: Peso molecular Estructura Hidrofobicidad, etc.
ii) MÉTODOS DE CUANTIFICACIÓN Métodos semicuantitativos: se cuantifica por ejemplo en función del color emitido o absorbido en una reacción enzimática.
La espectrometría de masas, por ejemplo, se cuantifica en relación carga/masa ⁄ de las sustancias analizadas.
Técnica muy precisa que analiza la composición de los diferentes elementos químicos en función de su relación m⁄z .
iii) SEPARACIÓN DE UNA MUESTRA La técnica a utilizar depende de la matriz donde se encuentra la proteína: Electroforesis / Western Blot / etc.
Cromatografía líquida Esta última técnica separa físicamente los diferentes componentes de una solución por la absorción selectiva de los constituyentes de una mezcla.
En toda cromatografía existe un contacto entre dos fases, una fija que suele llamarse fase estacionaria, y una móvil (fase móvil) que fluye permanente durante el análisis, y que en este caso es un líquido o mezcla de varios líquidos. La fase estacionaria por su parte puede ser alúmina, sílice o resinas de intercambio iónico que se encuentran disponibles en el mercado. Los intercambiadores iónicos son matrices sólidas que contienen sitios activos (también llamados grupos ionogénicos) con carga electrostática (positiva o negativa). De esta forma, la muestra queda retenida sobre el soporte sólido por afinidad electrostática. Dependiendo de la relación carga/tamaño unos constituyentes de la mezcla serán retenidos con mayor fuerza sobre el soporte sólido que otros, es decir serán adsorbidos, lo que provocará su separación.
4. Aplicaciones.
Detección de fraudes alimentarios: (a) Indicador de carne de pollo en vez de carne de gallina.
Interacción de proteínas.
Determinación de perfiles nutricionales.
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