Práctica 1.2 (2015)

Pràctica Español
Universidad Universidad Pompeu Fabra (UPF)
Grado Medicina - 1º curso
Asignatura Fisiología general
Año del apunte 2015
Páginas 3
Fecha de subida 20/04/2016
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Fisiología  Celular  I,  Práctica  1       10/IV/2015   Hipótesis  1:  los  oxidantes  producen  la  muerte  celular.   Hipótesis   2:   los   antioxidantes   protegen   a   las   células   de   los   efectos   de   los   oxidantes.     4.2  Desarrollo  experimental  (Día  2)   4. Ensayo  de  MTT  (continuación)   -­‐ Tras   incubar   los   pocillos   durante   20   horas,   se   disponen   12microlitros   del  reactivo  MTT1.  Debe  actuar  alrededor  de  unos  dos  horas.   -­‐ Pasadas   las   dos   horas   se   añaden   100microlitros   de   DMSO,   para   paralizar  la  reacción  del  MTT.   -­‐ Finalmente   se   mide   las   absorbancias   a   570nm   y   655nm.   El   lector   de   placas   ELISA   automáticamente   resta   a   las   medidas   obtenidas   a   570nm   las  medidas  de  655nm.     5.  Obtención  de  los  resultados   Los  resultados  finales  se  obtienen:       1   2   3   4   5   6   • Calculando  los  valores  pormedios  de  las  cilas  A  y  B:  (A+B)/2   • Restando  el  valor  correspondiente  al  promedio  del  medio  solo.  Obtendremos  la  Abosrbancia  absoluta,  porque  quitamos  todo  aquello   que  no  nos  interesa,  es  decir,  la  absorbancia  basal.   • Calculando  el  porcentaje  de  todos  los  valores  respecto  al  control  (100%).  -­‐-­‐>  uniendo  lso  resutados  de  todos  los  grupos  de  prácticas.   • Haciendo  la  media  (Promedio)  de  los  resultado  del  %.     • Haciendo  un  análisis  estadístico  asumiendo  que  tenemos  muestras  pariadas  (dependientes  unas  de  las  otras)  -­‐-­‐>  Cálculo  Prueba  T.   • Calculando  la  desviación  estándars.  Esto  es,  analizar  la  dispersión  de  los  resultados.     Una   vez   calculado   el   promedio   de   los   porcentajes   de   todos   los   grupos   se   pueden   realizar  distintas  pruebas  (todas  ellas  necesarias):     ⇒ Análisis   de   la   dispersión   de   los   resultados:   calcula   desviación   estándar   (Sd)   y  error  estándar  (Es).Puesto  que  se  trata  de  un  total  de  8  grupos  (N=8),  se   !"#$"#%& calculará  solo  el  𝐸! =   ! ⇒ Análisis   estadístico   de   los   resultados:   prueba   T.     Esta   prueba   sirve   para   demostrar  si  los  valores  son  ciertos,  es  decir,  compara  los  resultados  con  un   segunda   población,   determinando   si   las   diferencias   en   los   resultados   son   debidas  a:   o El  azar  (P  >  0.05  =  hipótesis  falsa)   o Procedimientos  experimentales  (P  <  0.05  =  Hipótesis  cierta).                                                                                                                       1  Reactivo  que  dará  lugar  a  color  azul  en  las  células  vivas.  Es  metabolizado  en  las  mitocondrias.  Nos   permitirá  leer  posteriormente  la  absorbancia  para  detectar  la  concentración  de  células  vivas.     Fisiología  Celular  I,  Práctica  1       Tabla  de  resultados  grupo  G:       Ab1   Ab2   Medio   0,014   Control   0,162   VitE=AOx1   0,258   GSH=AOx2   1,588   H2O2=  Ox.1   0,015   Men  =  Ox.2   0,021   VitE+H2O2   0,129   VitE-­‐  Men   0,114   GSH+  H2O2   1,512   GSH+  Men   0,348               Tabla  porcentajes  grupos  A  a  H:     10/IV/2015   Mitjana  Ab   0,016   0,167   0,293   1,661   0,02   0,023   0,101   0,101   0,953   0,153   0,015   0,1645   0,2755   1,6245   0,0175   0,022   0,115   0,1075   1,2325   0,2505     Gr  A   Gr  B   Gr  C   Gr  D   Gr  E   Gr  F   Gr  G   Gr  H   C   100   100   100   100   100   100   100   100   𝒙   DESV.   Es   Prueba     T   100   0   0       21,3 1   54,92   0,0024 29106   SI*   139,8 47   865,4 37   0,1913 31276   0,0949 12733   NO   913,2 72   19, 41 8   49, 44   30 5,9 7   32 2,8 9   66 2,4 7   99 2,5 59   0,0901 79886   NO   0,0131 56516   SI*   0,1312 12839   NO   H2O2 3,55   0,95   0   -­‐  Ox.1   0,75   6,45   157, 14   Men  -­‐   3,55   6,19   9   Ox.2   VitE+ 158, 141, 104, H2O2   87   9   5   0,25   4,3   14,5 5   260, 21   4,68   3,63   53,9 5   2571 66,8 181, 437, ,42   8   21   44   VitE-­‐   Men   238, 7   2714 61,8 ,28   7   195, 04   1,67   0   f(X)   %   estadistico       0,1495   100%   0,2605   174,2474916   1,6095   1076,588629   0,0025   1,672240803   0,007   4,682274247   0,1   66,88963211   0,0925   61,8729097   1,2175   814,3812709   0,2355   157,5250836   400   139, 04   128, 37   19,2 5   GSH+   1478 736, H2O2   ,01   19   931, 98   98,9   2895 5985 814, ,69   ,71   38   1703 1830 1873, ,63   ,56   748   GSH+   253, Men   19   97,2 9   24,4   435, 48   375, 75     140, 95   8142 157, ,85   52   192, 12   461, 08   1203 2807, ,42   382   NO   Fisiología  Celular  I,  Práctica  1       10/IV/2015   Diagramas  de  barras  resultados  obtenidos:     Control  H2O2   2000   1800   1600   1400   1200   1000   800   600   400   200   0   Control  Menadiona   1400   1200   1000   800   600   400   * Control   Serie1   * 100   H2O2-­‐  Ox.1   VitE+H2O2   21,31375   200   GSH+   H2O2   437,4425   1830,56125   0   Serie1   Control   Men  -­‐  Ox.2   100   53,95   VitE-­‐  Men   GSH+  Men   461,08375   1203,42875       En  los  resultados  esperados:     -­‐ Las  barras  del  oxidante  respecto  al  control  deberían  ser  más  bajas  para   calcular  Prueba  T.   -­‐ Las   barras   del   antioxidante   +   oxidante   frente   al   oxidante   deberían   der   más  altas.   -­‐ Las  barras  de  los  antioxidante  +  oxidante  frente  al  control  deberían  ser   más  bajas.                             Los   gráfico   obtenidos   no   dan   los   resultados   esperados   inicialmente   seguimos   el   siguiente  procedimiento:   -­‐ Oxidantes  más  bajo  que  el  C  à  podemos  calcular  la  prueba  T   -­‐ Puesto   que   en   el   caso   de   los   aox   +   ox   la   relación   no   es   la   esperada,   dejamos  de  lado  el  control  y  seguimos  la  segunda  relación:   o Antioxidante  +  oxidante  >  oxidante  à  calculamos  prueba  T   o Antioxidante   +   oxidante   <   oxidante   à   No   podemos   calcular   prueba  T     Finalmente,   se   confirma   que:   el   agua   oxigenada   es   un   oxidante   que   produce   la   muerte  celular  y  el  GSH  actúa  como  antioxidante  protegiendo  las  células  del  H2O2.   ...