tema 1 (1) (2017)

Apunte Español
Universidad Universidad Santiago de Compostela
Grado Biología - 4º curso
Asignatura bioquímica clínica
Año del apunte 2017
Páginas 10
Fecha de subida 22/06/2017
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INTRODUCCIÓN A LA BIOQUÍMICA CLÍNICA Y A LA PATOLOGÍA MOLECULAR La bioquímica clínica se encarga de los aspectos bioquímicos de la vida humana en la salud y en la enfermedad, y de la aplicación de los métodos bioquímicos de laboratorio para el diagnóstico, control del tratamiento, prevención e investigación de la enfermedad (Bioquímica Clínica, González de Buitrago y Sánchez-Pozo, 1998) FUNCIONES DE UN BIOQUÍMICO CLÍNICO 1. Función asistencial a. Diagnóstico y seguimiento de una enfermedad. Para ello el Bioquímico Clínico debe de: a. Disponer de pruebas analíticas y funcionales b. Evaluar dichas analíticas c. Relacionarlas con aspectos biológicos, patológicos, etc.
Es una hipótesis. Nosotros tenemos unos datos que están en el historial clínico y en base a eso el médico formula una hipótesis. Esa hipótesis puede ser: i. Aceptada ii. Rechazada iii. Ampliada iv. Modificada Diagnóstico y pronóstico: los análisis bioquímicos permiten identificar y seguir el curso de la enfermedad… pero valor limitado.
TEMA 1 INTRODUCCIÓN A LA BIOQUÍMICA CLÍNICA Y A LA PATOLOGÍA MOLECULAR 1 Ejemplo: la disminución de los niveles de aspartato amino transferasa (AST) n el suero del paciente con hepatitis (análisis cuantitativo) puede significar una recesión de la enfermedad o que el paciente se encuentra en un estado final de cirrosis (no queda más enzimas por salir del hígado, y por eso se reducen en el suero) Necesitamos algo que es muy importante que es la “unidad de caso”. Hay que examinar al enfermo y evaluar todos los datos disponibles sobre la enfermedad del paciente (citológicos, físicos, bioquímicos etc.) antes de emitir un juicio En los hospitales grandes es difícil integrar la información por la división del trabajo lo que genera problemas de interpretación Ejemplo: ¿Cómo interpretamos las cifras de recuento de hematíes (hematología) sin conocer las cifras de hierro (bioquímica)? (Podría ser una anemia hemolítica o una anemia feroopénica) Bases de datos de pacientes hospitalarios Detección precoz y medicina preventiva   Diagnóstico de enfermedad que no muestran ninguna sintomatología Excelentes resultamos médicos y económicos. Ejemplo: leve glucosuria, microaluninuria, CRP de alta sensibilidad (más propensión a tener un infarto de miocardio) Análisis toxicológicos Diagnóstico genético: casos especiales de detección precoz. La presencia de una determinada variación genética no significativa de desarrollar la enfermedad pero si normalmente una mayor predisposición. Elevado grado de anticipación. Consejo genético - Ejemplo: HLA-B27 y espondilitis anquilosante (95% sensibilidad). Tener el gen no significa necesariamente que se sufrirá espondilitis anquilosante (< 1 de cada 20 personas HLA-B27+ desarrollarán la enfermedad). Otros genes implicados: IL23R y ERAP1 lección de parámetros que se van a analizar. El estudio completo sube mucho el gasto sanitario. Siempre se va a marcadores que pueden dar mucha información, dejando de lado cosas que sean menos informativas (menores valores predictivos).
Inmediatez del análisis: "al lado de la cama del paciente mejor que en el laboratorio". Química seca.
Minimizar riesgos en el laboratorio: Aerosoles, reducir el número de pasos y manipulación de la muestra, equipamiento adecuado, formación correcta del personal.
Etiquetado cuidadoso. Trazabilidad.
Calidad en las determinaciones. Controles de calidad.
TEMA 1 INTRODUCCIÓN A LA BIOQUÍMICA CLÍNICA Y A LA PATOLOGÍA MOLECULAR 2 2. Investigación básica: Bases bioquímicas y moleculares de las enfermedades o pérdida de la homeostasis del organismo.
3. Investigación aplicada (I+D+i): incorporación de los avances en ciencias básicas y tecnológicos a la Medicina, con el fin de abaratar costes y lograr mayores fiabilidades e inmediatez en los resultados.
FASES DEL ANÁLISIS - - Fase preanalítica: es la primera. Es donde se produce el mayor número de errores.
Desde que se solicita el análisis hasta que se almacena. Se generan muchos errores en parte porque hay muchas personas implicadas.
Fase analítica Fase posanalítica En todas las fases se pueden cometer fallos TIPOS DE MUESTRAS SANGRE: Muestra más frecuente. Punción venosa, arterial o dérmica. Algunas determinaciones en sangre completa (enzimas de los glóbulos rojos, hemoglobina A1c, plomo, gases, amonio), pero la mayor parte se realizan en derivados (suero o plasma).
TEMA 1 INTRODUCCIÓN A LA BIOQUÍMICA CLÍNICA Y A LA PATOLOGÍA MOLECULAR 3    Sangre arterial: lleva los nutrientes a todos los tejidos del cuerpo, composición uniforme (porque no ha pasado todavía por los tejidos). Se suele utilizar para gases y pH Sangre venosa: mayor parte de las determinaciones (cloruro, bicarbonato, a veces también pH, transaminasas…) Composición variable.
Punción dérmica (en el dedo o en talon). Es una mezcla entre los dos tipos de sangre.
Hay que hacerlo correctamente, porque si apretamos mucho la estamos contaminando con líquido intersticial Toma de muestra de sangre venosa 1. Paciente sentado o semisentado. Abrir y cerrar la mano para aumentar el volumen de sangre en las venas del brazo (actualmente se desaconseja porque puede liberar metabolitos del músculo en la sangre).
2. Aplicar antiséptico (alcohol): Debe de secarse antes de introducir la aguja para evitar hemolisis.
3. Compresor (goma) para dificultar el reflujo de sangre hacia el corazón y facilitar la exposición de la vena. Hemoconcentración (pasa el plasma pero no el componente celular).
4. Se coloca la aguja en paralelo a la vena (cubital, mediana o basílica), con el bisel hacia arriba, y se introduce dentro de ésta.
5. Se conecta el tubo de vacío y se realiza la extracción. Se quita el compresor.
6. Una vez terminado se retira la aguja, se desecha en un contenedor de residuos seguro, se aplica un algodón o gasa con algún agente desinfectante, se dobla en brazo para facilitar que cese de sangrar Toma se sangre arterial Es bastante doloroso. Es importante que la jeringuilla sea de cristal porque si no se pierden los gases. Se extrae normalmente de las arterias radial (muñeca), braquial (parte interior codo) o femoral (ingle). Los latidos cardiacos (pulso) indican donde está la arteria. Más dolorosa.
TEMA 1 INTRODUCCIÓN A LA BIOQUÍMICA CLÍNICA Y A LA PATOLOGÍA MOLECULAR 4 También se pueden obtener muestras de sangre a través de catéteres permanentes (líneas venosas centrales) o no (líneas venosas periféricas) mediante los cuales se les suministra distintas soluciones al paciente. Unidades de Cuidado Intensivo (UCI) de los hospitales y en quirófano. Riesgo de que las muestras se contaminen con las soluciones que se le suministran al paciente a través del catéter; cuando se recogen con una jeringuilla se descarta algo de volumen y luego, con una nueva, se toma la muestra.
Donde se recoge la sangre La sangre se recoge en tubos de vacío:     Estériles Volúmenes diferentes (2, 5, 7, 10 mL) Generalmente de cristal, pero los de plástico se emplean cada vez más (menor peligro de rotura y contaminación biológica).
Tapones de goma con código de colores en función de la sustancia que contiene el tubo.
Lo más típico es obtener plasma o suero. El plasma se obtiene con anticoagulantes (heparina, EDTA). Para cada tipo de determinación unos tubos determinados. Cuando centrifugamos la sangre obtenemos un plasma (la parte de arriba). En ese plasma se puede determinar diferentes cosas. Los anticoagulantes pueden ser de distinto tipos (líquido, sólido, distintas sales…). Otro que se utiliza es el citrato, es un quelante de calcio. Otros adictivos son el floruro y oxalato para que las células sanguíneas no fastidien la glucosa que queremos medir, bloquea la glucólisis (las células que extraemos son metabólicamente activas). La heparina impide la coagulación uniéndose e inactivando la trombina Si queremos determinar suero. Los tubos contienen una sustancia que acelera la coagulación sanguínea y tienen abajo un gel (gelosa) que lo que hace es acelerar la coagulación sanguínea y cuando nosotros introducimos sangre y centrifugamos esa sangre coagulada la forzamos contra el gel y lo que estamos haciendo es aumentar la densidad de las células, aumenta por encima de la del gel, las células se van para abajo y separa las células del suero (queda el suero aislado). Existe lo mismo para el plasma, pero lo más típico es para el suero. Así las células quedan aisladas y no nos alteran la composición del suero Código de colores: puede variar ligeramente.
TEMA 1 INTRODUCCIÓN A LA BIOQUÍMICA CLÍNICA Y A LA PATOLOGÍA MOLECULAR 5 Tiene que haber un orden para la extracción de la sangre. Los últimos para sacar son el EDTA.
Los tubos que no tienen nada suelen ser los primeros.
Suero y plasma se suelen emplear indistintamente en los ensayos de laboratorio, salvo excepciones. Hay diferencias: concentración fosfato es menor en plasma y la de potasio es mayor en suero.
Ventajas del plasma: - Más inmediato Mayor cantidad Obligatorio en determinación de fibrionógeno Concentración de fosfato es menor en plasma Ventajas suero: - Sin interferencias de los anticoagulantes Es más simple Concentración proteica menor y más simple: electroforesis de proteínas (desaparece fibrinógeno de región ɣ) Mayor [K+], procedente de plaquetas.
MUESTAS DE ORINA Análisis de rutina. Barato y rápido.
Diagnóstico de enfermedades genitourinarias y metabólicas. Puede revelar patologías asintomáticas (ej., diabetes mellitus, glomerulonefritis, etc).
TEMA 1 INTRODUCCIÓN A LA BIOQUÍMICA CLÍNICA Y A LA PATOLOGÍA MOLECULAR 6 Tres tipos de análisis:    Químicos Bacteriológicos Microscópicos Varios métodos de recogida de la muestra de orina:     A primera hora de la mañana Durante un periodo de 24 horas.
En ocasiones especiales (coma): catéter hasta la vejiga a través de la uretra. Riesgo de infecciones o lesiones.
Punción suprapúbica transabdominal de la vejiga. Muestras puras de orina. Recién nacidos o niños pequeños.
Muestreo a primera hora de la mañana (primera micción)      Indicada para análisis cualitativos y bacteriológicos.
Antes de ingerir fluidos. Orina hipertónica (concentrada, deshidratación nocturna).
Capacidad concentradora renal. Si d>1.022, función renal adecuada.
Descartar primera mitad (microorganismos y contaminantes de la uretra). Frasco estéril (especialmente si es para análisis bacteriológicos) cerrado herméticamente.
Resultados expresados por unidad de volumen (cuantitativo) o positivo/negativo (cualitativo) Muestreo de orina de 24 horas:       Para análisis cuantitativos, debido a la enorme variación diurna en la concentración de muchas sustancias en orina (proteínas, sodio, potasio, calcio, fosfato) El paciente debe descartar la primera orina de la mañana, anotar la hora de esa micción y recoger las siguientes micciones durante un periodo de 24 horas.
Recipiente estéril de 4 L con conservante añadido. Refrigeración.
Se mide el volumen total, se homogeniza y se analiza una alícuota.
Requiere la cooperación del paciente. Problemas con pacientes pediátricos.
Contaminación fecal en niños.
Solución: referir la concentración de la magnitud biológica respecto de la creatinina, un compuesto que se excreta de manera uniforme en cada individuo Otras muestras: LCF, líquido sinovial, liquido pleural, heces, exudados… TEMA 1 INTRODUCCIÓN A LA BIOQUÍMICA CLÍNICA Y A LA PATOLOGÍA MOLECULAR 7 IDENTIFICACIÓN DEL ESPÉCIMEN Las muestras deben ser acompañadas de una serie de informaciones - Nombre y apellidos, fecha de nacimientos, numero de historia clínica y numero de muestra Número del médico que ha solicitado el análisis Nombre de la persona que ha realizado la extracción o recepción del espécimen, así como el día y la hora de éstas Otras observaciones Parte de la información va adherida (etiqueta) a la muestra. Información adicional puede ser obtenida mediante la lectura de los códigos de barras o códigos BIDI.
TRANSPORTE DE MUESTRAS Idealmente las medidas se deben de realizar antes de 1 h desde la toma de muestra. Como ello no siempre posible, suele ser necesario recurrir a la conservación de los especímenes Transporte y conservación de muestras de SANGRE Ejemplo: >2 horas a RT (temperatura ambiente) causan cambios en: - Glucosa (reducción ~2-3%/hora), Aumento de K+ y fosfato inorgánico Aumento de creatinina Modificación del proteoma TEMA 1 INTRODUCCIÓN A LA BIOQUÍMICA CLÍNICA Y A LA PATOLOGÍA MOLECULAR 8 - Acumulación de lactato y amonio Acidificación de la muestra.
Solución:    Glucosa: inhibidores de la glucolisis (fluoruro, iodoacetato) Bajas temperaturas de transporte: problema _ [K+]_ Transporte rápido Transporte a más largo plazo (a otro laboratorio): - Mejor plasma o suero que sangre completa.
Uso de bolsas de hielo, cajas aislantes y transporte por la noche suele ser suficiente.
Transporte y conservación de PLASMA y SUERO - No agitar una vez centrifugado (hemolisis) Tubos sin gel separador: recoger lo antes posible Tubos con geles separadores: almacenamiento sin recoger el suero de cuatro horas hasta 48-72 horas (4ºC) después de centrifugar (con tapa). Hasta siete días Analitos lábiles (CK, LDH, hormonas peptídicas): - Mejor congelar a –70ºC de manera rápida. Nieve carbónica durante el transporte.
Problemas con compañías aéreas.
Evitar ciclos congelación/descongelación.
- Problema: algunos enzimas (fosfatasa alcalina) aumentan su actividad por congelación (destrucción de inhibidor).
Transporte y conservación de MUESTRAS DE ORINA Se contaminan con mucha facilidad Inmediatez, > 1 hora sin refrigeración o conservantes genera - - Cambios de color y turbidez - el frío impide la contaminaicón bacteriana, pero precipita calcio y fosfato (cristalización) y produce turbidez Reducción de determinados componentes y cambios de pH: – Acidificación y reducción de la concentración de glucosa: bacterias y levaduras.
– Alcalinización: por descomposición bacteriana de la urea amoniaco.
– Pérdida de cuerpos cetónicos (volatilidad acetona).
– Pérdida de bilirrubina y urobilinógeno (por la luz). Uso de frascos forrados de papel de aluminio.
– Desaparición de células (eritrocitos, leucocitos) y cilindros: es importante que la orina sea fresca. No utilizar conservantes TEMA 1 INTRODUCCIÓN A LA BIOQUÍMICA CLÍNICA Y A LA PATOLOGÍA MOLECULAR 9 Ciertos componentes de la orina son estables sin el uso de conservantes. Ejemplos: electrolitos y creatinina.
En otras ocasiones es necesario usar conservantes o variar el pH inicial de la orina (4.5-6.5): - Timol Azida sódica Fluoruro sódico. Conservación de orina de 24 horas. Inhibe la glucolisis y el crecimiento de bacterias, pero no el de levaduras.
Acidificación (pH 1-3): calcio, fósforo, catecolaminas o aminoácidos.
Tamponamiento a pH 6-7: ácido d-aminolevulínico o porfirinas.
Las muestras de orina también pueden ser congeladas FASE PREANALÍTICA Pocas magnitudes son constantes en humanos (Nº cromosomas, Nº ojos, etc).
La mayoría de las magnitudes son variables, y ello incluye a las bioquímicas.
Los resultados analíticos NO reflejan de forma absoluta la concentración del analito, lo que puede invalidar su interpretación.
¿A qué se debe?    Variabilidad biológica • Sexo • Raza • Variaciones cíclicas (ej., ritmos circadianos) • Dieta • Actividad física • Estrés • Ingesta de fármacos Factores técnicos en la fase preanalítica • Toma de muestra: postura, torniquete, etc • Transporte • Almacenamiento Factores técnicos en la fase analítica/postanalítica (apartado 3) Variabilidad biológica TEMA 1 INTRODUCCIÓN A LA BIOQUÍMICA CLÍNICA Y A LA PATOLOGÍA MOLECULAR 10 ...