1. Procedimientos de laboratorio (2017)

Apunte Español
Universidad Universidad de Oviedo
Grado Biología - 4º curso
Asignatura Análisis y evaluación biosanitaria
Año del apunte 2017
Páginas 4
Fecha de subida 01/11/2017
Descargas 0
Subido por

Vista previa del texto

Evaluación biosanitaria 1.Procedimientos de laboratorio Proceso analítico Los laboratorios están implicados en una gran parte del proceso de diagnóstico. A través de un método estandarizado se estudian distintas variables bioquímicas o fisiológicas de un paciente.
Para llegar a un diagnóstico primero el médico habla con el paciente, observa los síntomas, realiza una serie de preguntas y basado en una sospecha solicita determinados análisis, pregunta clínica. Al cabo de un tiempo le llegan unos resultados que confirman o rechazan su sospecha, respuesta bioquímica. El proceso desde la solicitud hasta el informe final es muy complejo, y en él hay lugar a que se produzcan errores. A día de hoy muchos de ellos se evitan informatizando o automatizando los procesos.
Al primer sitio al que llega la petición es a unas enfermeras, las cuales recogen las muestras que se han solicitado, que tienen que ser adecuadas para el análisis que se quiere realizar. Las muestras se llevan al laboratorio, donde se acumulan las de cientos de pacientes y se suelen realizar los análisis más rutinarios. Pruebas menos habituales es posible que tengan que ser trasladadas a otros centros. Hoy en día hay pocos análisis manuales, la inmensa mayoría están automatizados, hay unos robots que realizan todo el proceso, eliminando los errores de operador. El resultado son listas de números que hay que transformar en información interpretada, será el informe que se entregue al médico para que él lo interprete y pueda emitir el diagnóstico adecuado.
El proceso analítico son todos estos pasos que se acaban de describir, desde la solicitud hasta el resultado. Se puede dividir en una serie de fases: - (Prepreanalítica): el medico solicita el análisis y la muestras adecuada Preanalítica: proceso desde la toma de muestra hasta el transporte y llegada al laboratorio. Es la que más errores acumula ya que es la menos automatizada.
Analítica: se realizan pruebas en la muestra y se obtienen unos resultados Postanalítica: estos resultados se plasman en un informe (Postpostanalítica): se procura que el informe sea lo más sencillo de comprender posible Muestras para análisis Hay que tener la muestra adecuada para lo que queremos estudiar. Se obtiene por una serie de procedimientos estandarizados, normalizados, para que se consigan unas condiciones óptimas para lo que se va a estudiar y además los resultados de distintas muestras sean comparables. En este proceso hay que tener en cuenta la preparación, el momento, el espécimen, la identificación… Diferencia muestra/espécimen: - Espécimen: lo que obtenemos del paciente, sangre, orina… - Muestra: derivado del espécimen. Puede proceder de un espécimen modificado. Resultado de un pretratamiento y sobe la que se hace el análisis.
Espécimen sangre La muestra más abundante suele ser la sangre. No es solo un tejido, el plasma también es una representación del medio extracelular, y con ello del metabolismo. El espécimen sangre puede ser de tres tipos: - - Arterial: es oxigenada, procede de pulmón. Se utiliza concretamente en estudios de ácido/base. Se analiza tal y como viene, coincide espécimen con muestra Venosa en tubos al vacío: tiene un código de colores. Se utilizan unos tubos con un vacío en su interior medido para extraer un volumen concreto de sangre. Se usa una aguja especial que encaja con el tubo. Tienen un código de colores, y cada uno se una para una prueba específica. Hay ciertos tubos que no tienen nada dentro, por lo que la sangre acaba coagulando, luego se centrifuga y se toma el suero.
Venosa en tubos anticoagulantes: Otros tubos tienen sustancias anticoagulantes, si centrifugamos esta sangre separamos el plasma. Es más abundante utilizar el suero, que es el plasma sin los factores de coagulación. Algunos tubos vienen con un polímero inerte que al centrifugar separan las dos fases (celular y plasma), evitando contaminación de células que se pueden romper.
Cuando hay urgencia por el análisis no se puede esperar media hora a que la sangre coagule para tomar el suero. No hay problema porque muchos análisis se pueden realizar indistintamente en plasma o en suero. El código de colores de los tubos es el siguiente: - Tubo rojo: simple, no tiene nada. En él la sangre coagula pasado un tiempo Tubo amarillo: no tiene sustancias anticoagulantes, pero si tiene un polímero inerte de una densidad media entre el plasma y las células, de forma que al centrifugarlo separa ambas fases Tubo verde: tiene heparina, el anticoagulante natural que tenemos en la sangre.
Tubo violeta: contiene EDTA, quelante de Ca2+, ion necesario para la coagulación. Se utilizan para estudiar la celularidad del tejido. También para obtener el DNA de los leucocitos para estudios moleculares.
Tubo gris: tienen fluoruro (veneno celular) y oxalato (anticoagulante). Se usa en estudios de alcoholemia.
Tubo azul: tiene citrato, un quelante suave, sirve para estudiar la coagulación, se añade calcio en exceso para ver cuánto tarda en coagular.
Suero vs. Plasma Aunque en la mayoría de las ocasiones son equivalentes, no son iguales. Hay ciertos compuestos más abundantes en unos u otros. El plasma tiene valores más bajos en K+, LDH, AST… y valores más altos de Na+, Cl-, Ca2+, CO3H-… En general todas las sustancias abundantes en eritrocitos serán más elevadas en el suero, debido a que durante el proceso de obtención hay una cierta hemolisis. La hemolisis es la rotura excesiva de hematíes debido a una incorrecta extracción.
Es un error preanalítico, el más habitual que obliga a solicitar una segunda muestra.
Espécimen orina El segundo más importante. De dos tipos: recogida al azar o recogida a tiempos fijos. Al azar solo se pueden hacer análisis cualitativos y microscópicos, ya que a lo largo del día se emiten orinas más o menos concentradas. Se prefiere al de primera hora de la mañana, es la más concentrada. Para hacer análisis cuantitativos hay que realizar una medida estandarizada, a lo largo de 24h. hay problemas con que el paciente realice la recogida correctamente, con que se conserve de forma adecuada… Otros especímenes - - Heces: poco común. Por ejemplo para estudiar la elastasa (secreción pancreática), calprotectina (aparición de leucocitos en intestino), sangre oculta (heridas en el tracto digestivo superior) o análisis cuantitativo de absorción de líquidos.
Líquido encefalorraquídeo: se obtiene por punción lumbar. Con él se realizan estudios de proteínas, inmunoglobulinas, meningitis, hemorragias… Líquidos ascítico, pleural, sinovial, pericárdico: por punción. Diagnóstico bacteriológico.
Saliva: estudios de farmacocinética, fracción libre del fármaco, ciertas hormonas… Tumores sólidos: sobe todo en patología.
Variables de la fase preanalítica Factores técnicos Errores, procedimientos que se han hecho mal o no son adecuados: - - Técnica de extracción incorrecta, que puede llevar por ejemplo a hemólisis de sangre Éxtasis venoso prolongado: la presión que se aplica en el brazo para extraer la muestra hace que el agua se extravase, por lo que la sangre se concentrará en células.
Errores en tiempo de recogida: por ejemplo perder el pico de un fármaco Tipo de muestra inadecuada: que se recoja suero en vez de plasma. En caso de que se necesiten ambos es importante el orden de extracción, hay que pinchar primero los tubos vacíos y luego los que tienen anticoagulantes, para evitar posibles contaminaciones.
Incorrecto almacenamiento: no refrigerar o no centrifugar… Todo esto se previene utilizando los protocolos correctos.
Factores fisiológicos Variables biológicas exógenas: son factores del paciente controlables.
- Postura: el cambio de posición afecta a la distribución del agua corporal Ingestión: a corto plazo, según lo que se come aumentara la concentración de determinados componentes en sangre. Otros dependen de hábitos a largo plazo, de la dieta que se lleva.
Hospitalización: la inmovilización afecta al metabolismo. Los procedimientos que se realicen mientras se está ingresado también afectan al funcionamiento del cuerpo.
Ejercicio físico: dependen de la intensidad, duración y lo entrenado que esta el individuo Fármacos Estado general: fiebre, traumatismos… Los efectos exógenos se combaten estandarizando la toma de la muestra: la posición, la hora… Variables genéticas o endógenas: son factores no controlables.
- - Edad y sexo: la inmensa mayoría de variables bioquímicas cambian por estos dos factores. Por ejemplo los lípidos en sangre aumentan con la edad, o la fosfatasa alcalina en sangre, que es muy elevada durante el periodo de crecimiento y decae de forma brusca al llegar a adulto. Obviamente las diferencias hormonales tienen una gran influencia.
Embarazo: grandes cambios a nivel hormonal y no hormonal Raza: según cantidad de musculo, grasa, condiciones del ambiente en el que viven… Cíclicos: cambios estacionales, cantidad de ejercicio, ingesta incrementada, menstrual, circadiano… Peso: se puede deber a, o puede causar alteraciones en el metabolismo de lípidos y glucosa.
Estos valores que pueden variar se tratan de contrarrestar o normalizar con valores apropiados de comparación, que se suelen entender como normales. Tendremos distintos valores normales según la edad, sexo, peso… Métodos y técnicas de análisis La metrología es la rama de la física que se dedica al estudio de la medición de las magnitudes. Su objetivo es una armonización y normalización de los resultados. Trata de conseguir que la metodología de los resultados más precisos posibles, utilizando la trazabilidad y un campo de tolerancia del grado de incertidumbre.
- La incertidumbre es el error que siempre va a contener una medida, debido a limitaciones del aparato La trazabilidad es la capacidad de relacionar los resultados de un laboratorio con unos valores internacionales, a través de una cadena continua de comparaciones.
Según su grado de precisión, podemos distinguir varios métodos: - Métodos definitivos: sin inexactitud, valores definitivos o verdaderos. Se sabe que no tienen error. Son muy complejos y costosos. Se realizan por organizaciones internacionales Métodos de referencia: tienen un cierto grado de incertidumbre, pero mínimo. Se obtienen unos valores asignados en calibradores. Es la usada por los fabricantes.
Métodos de inexactitud conocida: Usada por laboratorios Método de inexactitud desconocida: hasta que un método no se analiza esta fuera de la cadena de trazabilidad y no debería utilizarse.
Los métodos pueden ser cualitativos, semicuantitativos o cuantitativos. La mayoría son cuantitativos, aunque después se transformen a una variable cualitativa.
Espectrofotometría Muchas de las mediciones que se realizan en un laboraorio son metabolitos, utilizando este método. Se basa en medir concentraciones según la absorbancia de la muestra. Basado en la ley de Lambert-beer. En ocasiones el metabolito se puede medir directamente, en otras hay que hacer una reacción estequiométrica para convertirlo en otro que si puede ser medido.
Turbidimetría y nefelometría Cuando las proteínas son muy abundantes podemos usar unos métodos menos sensibles. Se utilizan una serie de anticuerpos (policlonales) contra la proteína, y por la reacción Ag-Ac aumentará la turbidez, se formarán partículas de mayor tamaño. La turbidez se mide por la dispersión que se produce en un rayo de luz que atraviesa la muestra. La luz que llega al sensor es menor, no porque se haya absorbido, si no porque se ha dispersado. El nefelómetro mide la luz que se ha dispersado en un ángulo determinado, es algo más preciso.
Hay que tener en cuenta que la inmunoprecipitación solo vale para determinadas concentraciones, a valores demasiado altos de la proteína o del Ac no se forma inmunocomplejo Electroforesis En un medio con pH determinado, las proteínas tienen una carga concreta. Al aplicar una corriente las proteínas migrarán por un gel hacia el polo contrario. Según el patrón de bandas que se encuentre se podrán diagnosticar ciertas enfermedades. Esta técnica también se emplea en la secuenciación del ADN.
Inmunoensayos Análisis que emplea anticuerpos monoclonales como reactivo, los cuales están dirigidos a un compuesto concreto.
El primer método consiste en mezclar la proteína de la muestra con la misma proteína, pero marcada con fluorescencia. Se añade el Ac especifico a una concentración conocida, y al cabo de un tiempo de incubación se retira toda proteína que no esté unida a Ac. Con los datos conocidos, al ver la fluorescencia sabemos la proporción del Ac que se ha unido a la proteína fluorescente, y nos permite calcular la proporción prot muestra/prot fluorescente, y a partir de esto la concentración inicial de proteína en la muestra.
Hay muchos otros inmunoensayos, como el ELISA.
Detección electroquímica Se utilizan electrodos selectivos. Se mide la diferencia de potencial entre el electrodo que se introduce en la muestra y el electrodo en una solución conocida. Hay electrodos específicos para pH, sodio, potasio, calcio… El O2 no se mide por potenciometría, si no por amperometría, genera una corriente eléctrica.
*Automatización Toda estas técnicas hoy en día se realizan en robots que contienen todos los componentes necesarios. Esto supone una gran ventaja ya que la mecanización reduce la posibilidad de errores, facilita el control de calidad, la interpretación de los resultados… Alguna desventaja sería la necesidad de calibrarlos habitualmente y asegurarse de que sus medidas son fiables.
...

Tags:
Comprar Previsualizar