T10, Reordenaciones genómicas (2014)

Apunte Español
Universidad Universidad Rovira y Virgili (URV)
Grado Bioquímica y Biología Molecular - 2º curso
Asignatura Expressió i replicació génica
Año del apunte 2014
Páginas 20
Fecha de subida 10/04/2015 (Actualizado: 10/04/2015)
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TEMA 10 Reordenaciones genómicas Características generales de las transposiciones no programadas •Segmentos de DNA con movilidad intrínseca.
•Se desplazan a nuevas posiciones genómicas.
•En el caso más sencillo, la inserción provoca la supresión de un gen. Pero también pueden influir en la expresión de genes vecinos de la zona diana de inserción.
Tipos de elementos móviles • Elementos transponibles: en procariotas y eucariotas.
Características generales: el DNA del elemento contiene uno o más genes necesarios para su transposición y, en los extremos del DNA de estos elementos contienen secuencias específicas, repetidas e invertidas una respecto a la otra. Secuencias esenciales para su transposición. En eucariotas se consideran elementos transponibles siempre y cuando su transposición no implique la existencia de transcripción inversa.
• Retrotransposones: elementos móviles de eucariotas cuya transposición depende de mecanismos de transcripción y de transcripción inversa.
Contienen un segmento de DNA central que codifica para una transcriptasa inversa y otras proteínas.
Clase I: el segmento central está flanqueado por una secuencia repetida a cada lado, orientada en la misma dirección: repeticiones terminales largas (LTR).
En los extremos también tienen secuencias cortas repetidas invertidas.
Clase II: no contienen repeticiones terminales, y unos de sus extremos contiene con frecuencia un segmento rico en pares de bases A-T.
• Retrogenes (eucariotas): segmentos de DNA que carecen de las propiedades estructurales y codificantes de los elementos transponibles o de los retrotransposones, pero también se desplazan. Incluye a los seudogenes procesados y a las SINES.
Formación de duplicaciones en sitios de inserción •El mecanismo implicaría la producción de mellas escalonadas en las dos hebras del segmento dúplex que actúa de sitio de inserción potencial.
•El tamaño de la secuencia duplicada es variable: los elementos transponibles y los retrotransposones de clase I: duplicación de tamaño específico. Retrotransposones de clase II: tamaño variable.
•La existencia de duplicaciones en el sitio de inserción refleja las propiedades del propio enzima responsable de introducir las mellas escalonadas en la secuencia diana.
Los elementos móviles → secuencias repetidas dispersas •Cada elemento móvil aparece repetido muchas veces en el genoma → familias de secuencias repetidas dispersas → favorece la aparición de un número mayor de reordenaciones genómicas → pueden dar lugar a deleciones, duplicaciones, inversiones y translocaciones.
•Si estas reordenaciones son en células somáticas aisladas: escasa probabilidad de que se vea modificada la función de un tejido complejo.
•Si estas reordenaciones son en células de la línea germinal: pueden ocasionar mutaciones y aberraciones cromosómicas importantes.
•Además, estas reordenaciones pueden contribuir a cambios evolutivos (en una determinada población, por selección natural,…) Obtención de nuevas organizaciones genómicas. Dos repeticiones directas en un mismo segmento de dsDNA, pueden aparearse incorrectamente con las repeticiones de la hebra complementaria → se produce un desplazamiento. Si el apareamiento es cerca de la horquilla de replicación → amplificaciones y deleciones: a) El desplazamiento de la hebra molde debido al apareamiento incorrecto entre repeticiones directas, la escisión del lazo o su replicación, seguido todo ello de reparación de los huecos y sellado de las mellas b) El desplazamiento de una hebra que está siendo replicada y la reparación posterior puede dar lugar a una amplificación.
Lo realmente sorprendente es la estabilidad de la estructura de los cromosomas, dada la abundancia de secuencias repetidas dispersas en la mayoría de los genomas eucariotas. Es probable que la recombinación entre estos segmentos esté suprimida de forma activa, mediante algún mecanismo desconocido. En la levadura, en donde es posible medir tales recombinaciones utilizando técnicas genéticas, resulta que las translocaciones y las otras reordenaciones son poco frecuentes.
Elementos transponibles en procariotas Hay 3 clases: IS (insertion sequence), transposones compuestos y transposones. Los 3 poseen secuencias repetidas invertidas en los extremos y genes codificados en el interior → esenciales para la transposición. La inserción también conlleva la duplicación de una secuencia en el sitio de inserción. El tamaño de duplicación es específico para cada tipo de elemento en particular.
•Secuencias de inserción, IS: Tienen tamaños y secuencias definidas.
•Sus desplazamientos → mutaciones. Cuando se produce la transposición, una copia del elemento IS permanece en el sitio original → la transposición implica la síntesis precisa de una segunda copia del elemento. No es necesario que exista homología entre el elemento IS y su sitio de inserción en el genoma. La secuencia de uno de los extremos de los IS es siempre una repetición invertida de la secuencia del otro extremo. A veces la repetición es imperfecta.
•Estas secuencias repetidas son esenciales para la transposición y son exclusivas de cada IS. La longitud del DNA que se duplica también es diferente en cada IS. Los productos de los genes son enzimas, transposasas, esenciales para la transposición, a diferencia de los transposones que poseen otros genes no necesarios. Además, dentro de las IS hay promotores capaces de modular la expresión de genes situados en las proximidades del sitio de inserción.
•Transposones compuestos: elementos IS dentro del transposón compuesto.
La región central se encuentra flanqueada por IS completas: IS-L y IS-R.
Toda la información necesaria para su desplazamiento está codificada en la porción de su estructura que pertenece a los elementos IS.
Basta con una de las copias de los genes estructurales de IS para la transposición, lo que implica que las secuencias IS pueden ser algo diferentes.
IS-L y IS-R codifican para transposasas funcionales, pero IS-R es más eficiente.
•Transposones no compuestos: No están asociados a elementos IS. Las funciones necesarias para la transposición están codificadas en su interior.
•Ejemplo: elemento Tn3: su estructura incluye unos extremos repetidos invertidos (IR-L e IRR), necesarios para la transposición. En la región central hay secuencias que codifican para 3 genes: tnpA y tnpR, codifican proteínas de transposición, y amp También existe una región no codificante que contiene los promotores de los genes tnpA y tnpR, y una región denominada res, necesaria para la transposición. La presencia de un gen no es necesario para la transposición, en este caso amp, es una de las diferencias importantes entre los elementos IS y los transposones no compuestos.
Transposón no compuesto Tn3. Las cabezas de flechas indican la dirección de la transcripción de cada uno de los 3 genes.
•Sitios de inserción: Algunos elementos transponibles se insertan en secuencias diana, homólogas a los extremos del propio elemento; otras son más promiscuas. Muestran una leve tendencia a insertarse en regiones ricas en AT. Por otra parte, algunos elementos se insertan preferentemente en dianas con una secuencia palindrómica particular. Cada elemento provoca una duplicación de un tamaño característico; esto sugiere que la distancia entre las mellas escalonadas que se introducen en la diana están determinadas, al menos de forma parcial, por funciones codificadas por cada elemento en particular.
Transposición conservativa: el transposón sale del dador que queda vacío y se incorpora en un nuevo aceptor. No aumenta el número de copias del transposón en el interior de la célula.
Se expresa la transposasa, y realiza dos cortes de doble cadena a la misma altura en el genoma donante, dejando aislado el transposón.
Localiza una secuencia diana en el genoma aceptor, y realiza un corte cohesivo. Une los extremos a los del transposón y la ADN Pol de la célula rellena las zonas de cadena sencilla dejadas en la secuencia señal tras el corte cohesivo. Debido a esto, la secuencia señal queda duplicada.
Queda, sin embargo, un hueco en el genoma donante, que puede ser letal si no se repara.
Transposición no conservativa: La transposasa realiza un corte cohesivo en la secuencia diana y en el genoma donante. A continuación integra todo el genoma donante con el aceptor, mediante un mecanismo que forma un intermediario llamado “estructura entrecruzada”. Esta estructura es resuelta por un segundo enzima, la resolvasa, que según cómo lo resuelva dará lugar a una de las siguientes transposiciones: Transposición no replicativa: el genoma donante se libera, dejando el integrón en el genoma receptor. Al igual que en la transposición conservativa, queda un hueco en el genoma donante, que puede ser letal si no se repara.
Transposición replicativa: se produce una replicación desde los extremos 3’ del genoma aceptor, lo que acaba por duplicar el transposón, y produciendo un genoma mixto llamado “cointegrado”. A continuación la resolvasa rompe el cointegrado mediante una recombinación recíproca, que une los extremos del ADN aceptor original (ahora con una de las copias del integrón) y libera el genoma donante de nuevo con su transposón.
•Escisión: La escisión de los elementos transponibles no depende de funciones codificadas por los elementos. Los procesos de escisión resultan, probablemente, de reacciones de recombinación homóloga. Por este mecanismo puede eliminarse el elemento completo, junto con una de las dos secuencias repetidas flanqueantes. Como resultado de la escisión se regenera el sitio diana vacío original. Esto implica que una escisión puede corregir una mutación ocasionada por una inserción.
•Asociación entre elementos transponibles y varios tipos diferentes de mutaciones: Con frecuencia la inserción en una secuencia reguladora o codificante genera la pérdida de expresión del gen afectado, pero puede tener otro tipo de consecuencias: Un promotor, colocado en una posición adecuada dentro del elemento, provoca la expresión de genes vecinos que de otra forma habrían sido silenciosos.
Otro tipo de mutagénesis deriva de las reorganizaciones favorecidas por la transposición intramolecular: cuando el mismo genoma sirve de donador y aceptor.
La recombinación homóloga entre dos elementos idénticos en la misma orientación sobre una molécula de DNA puede ocasionar la deleción de las secuencias contenidas entre los dos elementos repetidos.
Transposición de los elementos P de Drosophila •Hay cerca de 40 miembros en la familia dispersos en genomas de ciertas cepas de drosophila.
Son de diferente tamaño pero todos poseen en sus extremos unos segmentos repetidos invertidos.
• ¿Cómo detectamos la capacidad de transposición de los elementos P? –El nº de copias de P varía entre cepas.
–Las posiciones genómicas de P también varia según la cepa.
–La inserción y escisión de elementos P en y de posiciones determinadas se correlaciona con mutaciones y reversiones, respectivamente, en genes específicos.
•Fueron descubiertos como resultado del estudio de la DISGÉNESIS HÍBRIDA, un fenómeno que ocurre cuando hembras de laboratorio son cruzadas con machos de poblaciones naturales. En estos cruces, las hembras tienen un citotipo M (sin transposasa ni su receptor), y los machos un citotipo P (con transposasa y su respectivo receptor).
hembras M x machos P F1 : estériles •Esta progenie híbrida es disgénica, o biológicamente deficiente ( de aquí la expresión disgénesis híbrida ).
•A la vez, el cruce de hembras P x machos M no produce disgénesis.
•Un alto porcentaje de los disgénicos induce mutaciones inestables, por ello revierten a un fenotipo salvaje. Esta inestabilidad es restringida a la línea germinal de citotipo M. Esto confirma la hipótesis de que las mutaciones son causadas por la inserción de DNA foráneo en genes específicos, haciéndolos inactivos. De acuerdo con esta hipótesis, la reversión resultaría de la espontánea escisión de las secuencias insertadas.
•Esta observación ha sido probada en el locus white de Drosophila, dando lugar a un cambio de color en los ojos.
La explicación de la disgénesis híbrida es que los elementos P tienen a la vez productos de transposasa y P-represores.
La transposasa es responsable de la movilización de los elementos P, mientras que el represor previene la producción de la transposasa.
En el citotipo P, el número elevado de copias provoca una abundante producción del represor, así que los elementos P no son movilizados. Por esta razón, en el cruce de la disgénesis híbrida al no haber represor (citotipo M) se sintetiza mucha transposasa, más que represor, y se moviliza por todo el genoma, entrando un cierto número de copias del elemento P en el óvulo, causando daño que se manifiesta en la disgénesis híbrida.
Elementos controladores del maíz (transposones) •Se han identificado, por lo menos, 3 familias. Cada familia posee dos categorias definidas genéticamente: – – Autónomos: inestables y capaces de transponerse y escindirse por si mismos.
No autónomos: estables, y solo se transponen cuando coexisten, en el mismo genoma, con un miembro autónomo de la misma familia.
•Son transposones relativamente sencillos, no muy diferentes a los de una IS bacteriana y tienen repeticiones invertidas en los extremos.
•En plantas (el maíz) los transposones también causan deleciones, duplicaciones, inversiones, translocaciones… en locus vecinos. Estas reorganizaciones recuerdan a las que afectan a secuencias vecinas en los sistemas procariotas, pero no se sabe si el mecanismo que opera en plantas es el mismo que en bacterias.
Los elementos Ds derivan de elementos Ac modificados. Ds puede ser activado si el genoma adquiere un elemento Ac autónomo.
Retrotransposones Características generales de los retrotransposones de clase I.
•DNA central flanqueado por LTR (repeticiones terminales largas), de longitud variable.
•En los extremos de las LTR hay secuencias repetidas invertidas.
•La inserción de un retrotransposón en una nueva posición del DNA va acompañada de la duplicación de una secuencia en el sitio de inserción. El tamaño del segmento duplicado (no la secuencia) es siempre el mismo para un elemento en particular.
•Constituyen familias de copias múltiples dentro de los genomas.
•Normalmente se transcriben y traducen activamente.
•Algunos transcritos son más pequeños que el tamaño completo del retrotransposón, y otros empiezan dentro de una LTR y acaban en secuencias que corresponden al otro del mismo retrotransposón.
•Los largos llevan toda la información de las secuencia del DNA del elemento. También contienen repeticiones directas en sus extremos (extremos redundantes), y son los intermediarios de la transposición.
•Aparentemente se copian a DNA por transcripción inversa (igual que algunos virus). Se ha visto que codifican para una transcriptasa inversa, entre otras proteínas.
Elementos Ty de levadura •Estructura típica de retrotransposones de clase I: – – – – – Región central (ε) está flanqueada por LTRs (δ).
Las repeticiones invertidas en los extremos de los LTRs son muy cortas (2 pb) Existencia de repeticiones directas de una secuencia de 5 pb en los sitios de unión entre ε y δ.
La inserción del elemento Ty genera una duplicación de 5 pb.
Las diferentes copias de Ty en un genoma no son iguales en secuencia. Las secuencias de los δ si que son idénticas.
Ty se desplaza: aislamiento de mutaciones ocasionadas por la inserción de estos elementos.
Hay muchas mutaciones de este tipo, a pesar de que la frecuencia de transposición es de 1 Ty por cada 108 células.
Algunas mutaciones interrumpen regiones codificantes reguladoras (extremo 5’). No se sabe por qué, pero estas regiones son las preferidas de Ty.
Las mutaciones en regiones reguladoras producen diferentes fenotipos: pueden bloquear la transcripción del gen o incrementarla. La sobreproducción depende de la transcripción del propio Ty.
Además, la activación de los genes vecinos a la transposición dependerá de la acción de un factor proteico codificado por la célula, que actuaría en trans uniéndose al DNA del segmento regulador. En levadura hay, por lo menos, 3 mutaciones que suprimen el efecto de activación de genes vecinos, que reciben el nombre de spt (supresoras de Ty). Los productos de los genes spt son necesarios para que la transcripción de Ty sea abundante.
El RNA como intermediario en la transposición de Ty: Los elementos Ty se transponen por transcripción inversa de una copia de RNA correspondiente a todo el elemento, de manera análoga a como lo hacen los retrovirus. Demostración experimental: Se introdujeron 2 plásmidos en células de levadura his3-. El plásmido dador contenía un elemento Ty que carecía de las primeras bases del extremo 5’ de δ; un promotor no relacionado reemplazaba al promotor de Ty. Además, el plásmido contiene un intrón de levadura (segmento punteado), junto con sus exones adyacentes (en negro), que interrumpe la región central ε de Ty. El plásmido diana contiene un gen HIS3 que carece de su propio promotor, la región centromérica que confiere estabilidad y una secuencia ARS, que permite su replicación. Se aislaron las colonias HIS3+ de la población, y se purificó y analizó el plásmido que contenían. El elemento Ty se había transpuesto desde el dador a la región flanqueante por 5’ del gen his3, proporcionándole un promotor del que transcribirse. El Ty transpuesto contenía dos δ completos, y el intrón había sido eliminado.
•2 conclusiones: –1. La transposición no requiere que exista un segmento δ completo en el extremo 5’, lo que marca una diferencia muy importante respecto a los elementos transponibles.
–2. El Ty incompleto regeneraba uno completo. En consecuencia, el segmento δ de 3’ debe proporcionar el molde para la síntesis del 5’. Esto es posible si se utiliza un intermediario de RNA. El mecanismo propuesto es virtualmente idéntico al que se ha establecido para la transcripción inversa del RNA de los retrovirus.
El mecanismo de escisión más probable de Ty es la recombinación homóloga entre segmentos δ de Ty.
Descripción esquemática de cómo la transcripción inversa del RNA retroviral genera DNA de doble cadena lineales flanqueados por LTR.
Elementos de clase copia (“copylike”), de Drosophila •Conjunto de familias de retrotransposones de clase I.
•Hasta 20 familias diferentes y pueden constituir hasta el 10% de su genoma.
•Como Ty, también poseen un segmento central flanqueado por LTRs. Cada LTR posee, en su extremo, una secuencia repetida invertida.
•La inserción de cada elemento en una nueva posición en el genoma está acompañada por la duplicación de un corto segmento de secuencia de DNA: el tamaño es característico de cada familia, y su secuencia es variable.
•Transposición: El número global de estos elementos en el organismo está sorprendentemente estabilizado → sugiere la existencia de mecanismos activos que limitan la expansión de cada familia. Estos elementos también producen mutaciones al insertarse, como su inserción en el locus white que producen moscas con ojos blancos o color albaricoque. Los elementos también pueden escindirse por recombinación homóloga entre LTRs. La escisión va asociada con frecuencia a la reversión de la mutación.
•Transcripción: Entre el 0.5 y 3% del RNA total de las células de Drosophila son de estos elementos. Dicho RNA está presente tanto en el núcleo como en el citoplasma y una fracción está poliadenilada. La abundancia de los transcritos es variable, dependiendo del momento del desarrollo y del elemento en particular. Los transcritos empiezan y acaban en secuencias internas de los LTRs, de forma que tienen extremos redundantes. Además, la transcripción parece unidireccional.
•Traducción: su RNA posee una capucha en el extremo 5’ y produce varios polipéptidos. Estos elementos codifican, probablemente, para una o más poliproteínas, que pueden ser recortadas por proteólisis generando las proteínas y enzimas típicas de estos elementos.
Las secuencias IAP de ratón: retrotransposones de clase I.
•Partículas A intracisternas (IAP): complejos ribunocleoproteicos del citoplasma. Aparecen en los momentos iniciales del desarrollo embrionario y en ciertos tumores.
•Las partículas se forman por gemación a partir del retículo endoplasmático, y quedan retenidas en las cisternas del aparato de Golgi.
•Las IAP contienen una proteína estructural, una transcriptasa inversa y varias moléculas de RNA específicas.
•Genes que codifican para las IAP: los miembros individuales de la familia difieren unos de otros. Los elementos contienen una región central flanqueada por LTR; cada LTR tiene en sus extremos una secuencia repetida invertida.
•Transposición y mutagénesis inducida por el DNA de las IAP: se mueven a sitios genómicos vacíos (intrones) y provocan mutaciones tanto en la línea germinal como en células somáticas.
La inserción también puede provocar un incremento en la expresión de genes vecinos.
Por ejemplo: Líneas celulares que no producen cadenas ligeras de inmonoglubina: se han encontrado elementos IAP insertado en los intrones del gen de la cadena ligera.
Modelo de inserción de DNA de doble cadena circular o lineal, retrovírico o de retrotransposón. Se realizan cortes escalonados en el genoma receptor y el donante (flechas), probablemente por acción de una endonucleasa codificada por el retrotransposón. El nº de pares de bases entre las mellas es probablemente específico de cada endonucleasa, ya que marca el tamaño de las duplicaciones en el sitio de inserción características de cada elemento.
Retrotransposones de clase II •No contienen repeticiones terminales largas.
•Su inserción provoca la duplicación del sitio diana, pero el tamaño de la duplicación es variable de uno a otro elemento de un genoma determinado.
•Capacidad potencial de codificar para una transcriptasa inversa.
•El extremo 3’ de una de las hebras contiene un segmento rico en residuos A.
•A pesar de que no está bien descrito, es probable que dichos elementos contengan la información para la síntesis de su propia transcriptasa inversa; también puede suponerse que se transponen por transcripción inversa de un intermediario de RNA.
La familia LINE-1 de los mamíferos •Su movilidad se conoce a raíz de mutaciones nuevas generadas por inserciones de secuencias LINE-1.
Por ejemplo: La inserción de una secuencia LINE-1 en el gen del factor VIII de coagulación sanguínea, ligado al cromosoma X, se detectó en niños hemofílicos cuyas madres poseían alelos de tipo silvestre para este gen (sin inserciones).
•La inserción provoca la duplicación de una secuencia en el sitio diana, variable. Pero dichas duplicaciones pueden estar presentes o no.
•Se han detectado DNAs circulares, formas que podrían ser intermediarias de la transposición.
Retrogenes •Capaces de transponerse usando un intermediario de RNA.
•No contienen información para una transcriptasa inversa.
•Carecen de secuencias terminales repetidas, tanto directas como invertidas.
•Contienen un segmento rico en A en el extremo 3’ de una de las hebras.
•Producen duplicaciones de secuencias del sitio diana de inserción cuyo tamaño es variable.
•Su transposición sería pasiva: el RNA podría ser inversamente transcrito por enzimas proporcionadas por los retrotransposones o retrovirus.
•La mayoría de retrogenes son seudogenes procesados: copias no codificantes de genes funcionales.
Seudogenes polipeptídicos procesados •Estructura: existen muchas formas diferentes, aunque por lo general se parecen a una copia del mRNA que a una copia del gen original correspondiente. Están situados en posiciones genómicas alejadas del locus que ocupa el gen funcional.
•Estructura básica. Por ejemplo: el gen procesado de la α-globina del ratón situado en el cromosoma 15 carece de los dos intrones del gen de la a-globina, situado en el cromosoma 11.
Comparación de las estructuras de los genes polipeptídicos y de sus seudogenes procesados Modelos de generación de seudogenes polipeptídicos procesados: Un modelo de la reacción que da lugar a su formación implica la transcripción inversa del RNA, y la posterior inserción del cDNA en una rotura escalonada del DNA del genoma.
•Problemas del modelo: 1. Se debe demostrar la existencia de transcriptasa inversa en los embriones tempranos o en células germinales. La reacción debe tener lugar en estos tipos de células para que el patrón de inserción pueda ser transmitido de forma hereditaria.
2. Debe existir un cebador apropiado para la reacción de transcripción inversa.
Seudogenes de RNA procesados • Estructura: Las familias de RNA pequeño nuclear (snRNA) incluyen diferentes clases de seudogenes que difieren de la secuencia del RNA funcional y de sus genes en una o unas pocas bases dispersas. Al igual que en los seudogenes polipeptídicos procesados, los genes de RNA procesados difieren de la estructura de los genes verdaderos en: suelen estar truncados y carecen del extremo 3’, aunque algunas veces contienen un 3’ rico en residuos A. También pueden estar flanqueados por cortas duplicaciones del sitio de inserción.
• Modelo de generación: similar al de los sudogenes polipeptídicos procesados.
Reordenaciones programadas y la modulación de la expresión génica: genes que codifican para proteínas del sistema inmune en vertebrados.
•A diferencia de los genes para otras proteínas, los genes que codifican para el repertorio de Ac y de receptores no están presentes en el zigoto. En lugar de ello, los precursores de estos genes se encuentran distribuidos por el genoma de las células germinales en forma de segmentos de DNA independientes. Los genes funcionales son ensamblados tras una serie de reordenaciones específicas, que solo tienen lugar durante el desarrollo de los linfocitos B y T.
•Antígeno → tienen epítopos, que estimulan la producción de Ac.
•El sistema inmune distingue: estructuras propias y no propias.
•Dos tipos de inmunidad: celular y humoral.
En la inmunidad humoral los Ac circulantes, secretados por las células B, interactúan con los Ag extraños, incluyendo bacterias, virus, hongos y proteínas.
La inmunidad celular está mediada por células T, a través de su interacción directa con células que presentan en su superficie las proteínas extrañas, junto con unas proteínas propias específicas.
•La combinación de las regiones VH y VL, que resulta de la propia estructura del anticuerpo, produce un sitio para la interacción con antígenos específicos.
•La especificidad está determinada por el ajuste, o complementariedad, de Ag-Ac. Existen 3 dominios de aminoácidos de las regiones variables VL y VH que son los responsables de la unión específica: regiones hipervariables o regiones determinantes de la complementariedad (CDR).
•Cada región variable posee 3 CDRs: CDR1, CDR2 y CDR3.
•La generación de la diversidad de las regiones V depende de la acción de varios mecanismos diferentes.
Genes de cadenas ligeras: hay reordenaciones en el DNA para producir genes completos de cadenas L durante el desarrollo de las células B.
Reordenaciones del DNA de la línea germinal, necesarias para generar un gen funcional codificante para una cadena ligera k. Durante la diferenciación de las células B, una región Vk es unida a una región Jk. Como resultado de esta reacción pueden perderse, o no, las secuencias intermedias entre Jk y Vk.
•La especificidad potencial de una cadena L está determinada, en parte, por el tipo de los segmentos VK y JK que se unen en la recombinación.
•Las recombinaciones de sitio específico que permiten la unión de una región VL con una JL dependen de una recombinasa específica. La recombinación depende de señales de reconocimiento.
•EL mecanismo de ensamblaje del gen de la cadena L ha evolucionado para maximizar la diversidad de las cadenas de Ac. La unión de cualquiera de las 300 regiones VK con cualquiera de los 5 segmentos JK pueden producir cerca de 1500 genes de cadenas LK diferentes.
•Aparte de generar diversidad, la reordenación que ensambla un gen de cadena ligera también activa su expresión. La reorganización acerca el promotor que precede cada segmento VK a una secuencia intensificadora situada en el interior del intrón que separa J K de CK Genes de cadena pesada: En la generación de la enorme diversidad de genes de cadena H, codificantes para las secuencias distintivas de las regiones VH, operan los mismos mecanismos recombinativos generales descritos para la generación de la variabilidad de las cadenas ligeras.
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