Discurso Trabajo Fin Rotación Asignatura Bioquímica (2017)

Trabajo Español
Universidad Universidad de Extremadura
Grado Química - 2º curso
Asignatura Bioquímica
Año del apunte 2017
Páginas 3
Fecha de subida 22/09/2017
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Descripción

Discurso del Trabajo Fin de la asignatura de Bioquímica de la Universidad de Extremadura

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DIAPOSITIVA 1.
Gracias a todos por venir. Intentaré ser breve. La presentación que voy a realizar es sobre la proteína S100 y de cuál es el uso que empezaremos a dar próximamente en el laboratorio de Urgencias.
DIAPOSITIVA 2.
Seguiré el siguiente esquema en la exposición. Primero empezaré con una breve introducción de lo que es la proteína S100 y de su utilidad médica y diagnóstica. Posteriormente describiremos lo que será su futura implementación en Urgencias. Luego explicaré los fundamentos físicoquímicos de la técnica analítica que emplearemos para su determinación y cuantificación, así como diversas cuestiones sobre la sensibilidad y precisión del método. Para finalizar, haremos un resumen de las principales conclusiones.
DIAPOSITIVA 3.
Las proteínas S100 forman una familia de proteínas de bajo peso molecular. Son diméricas, constando de dos polipéptidos, idénticos o no, los cuales se mantienen unidos por enlaces no covalentes. Hasta el momento en el ser humano se han encontrado 21 miembros de esta familia. Las proteínas S100 son estructuralmente similares a la calmodulina. Así, presentan dos sitios de unión de calcio con una conformación de hélice-bucle-hélice. Las proteínas S100 están implicadas en una gran cantidad de funciones intracelulares y extracelulares relacionadas con la homeostasis de este ion, entre las cuales destacan el control de la fosforilación de proteínas, los factores de transcripción, actividades enzimáticas, crecimiento celular y diferenciación, y en la respuesta inflamatoria.
DIAPOSITIVA 4.
Las proteínas S100 son intracelulares, de forma normal están presentes en las células derivadas de la cresta neuronal (células de Schwann) así como en el tejido epidérmico: condrocitos, adipocitos, células mioepiteliales, células de Langerhans, células dendríticas y queratinocitos.
DIAPOSITIVA 5.
Debido a su presencia en células del tejido epidérmico, las proteínas S100 son útiles como marcadores del melanoma, ya que los niveles de esta proteína se ven aumentados en sangre.
En el laboratorio de rutina tenemos implementado su análisis para el diagnóstico y seguimiento de esta enfermedad, por lo que para muchos de nosotros es una vieja conocida.
La novedad estriba en que esta proteína puede ser de gran ayuda en el diagnóstico del edema cerebral. Ya hemos dicho anteriormente que esta proteína se encuentra presente en células del tejido nervioso, y ante una lesión los niveles de S100 aumentan en sangre y LCR. El TCE tiene una alta incidencia en la población, en la UE se calcula que se dan 235 casos por cada 100000 habitantes. El TCE se caracteriza por no presentar una sintomatología específica, por lo que el consumo de pruebas (como el TAC) es notable. Tenemos el problema añadido de que apenas el 10% de los TCE evaluados como leves se ve en imagen, por lo que la proteína S100 puede ser utilizada como biomarcador en este tipo de lesiones.
DIAPOSITIVA 6.
Por sí solo, esta proteína no diagnostica el TCE leve, pero es de gran ayuda. Para el diagnóstico definitivo nos valemos además de tres pilares. Por un lado, en la evaluación de la consciencia del paciente mediante la escala de Glasgow. La escala está compuesta por la exploración y cuantificación de diversos parámetros, dando una puntuación a cada categoría. Los TCE se clasifican en leve, moderado o grave dependiendo de la puntuación final. Nos apoyaremos así mismo en las técnicas de imagen (TAC craneal) y en la evaluación de especialistas de diversas áreas involucradas (neurología, UCE, neurocirugía y urgencias generales). Se ha establecido en diversos estudios que si la concentración de S100 en suero supera los 0,100 / podríamos estar ante una lesión.
DIAPOSITIVA 7.
El protocolo que se va a seguir en Urgencias en lo que se refiere a la petición de la prueba de la S100 aún no se ha terminado de redactar. No obstante en lo que atañe al laboratorio lo tenemos resumido en el siguiente diagrama de flujo. Ante la sospecha de un paciente que pueda sufrir TCE, se le hará una evaluación mediante la escala de Glasgow. En Urgencias está establecido que aquellos pacientes con puntuación en Glasgow menor o igual a 13 se les pedirá una tomografía craneal para evaluar la posible existencia de LI. Para aquellos con puntuación de 14 o 15 se les pedirá en analítica la S100. Si la concentración es superior al corte se les pedirá el TAC, mientras que si por el contrario es inferior estarán en observación y luego se hará un seguimiento desde el ambulatorio.
DIAPOSITIVA 8.
Seguidamente explicaremos los detalles de la técnica. El aparato que utilizaremos es el Cobas 6000, concretamente el módulo e601 donde se alojan las técnicas de electroquimioluminiscencia. Por lo demás, el manejo del equipo es idéntico al de otras técnicas basadas en ECL en Urgencias. La única novedad estriba en que los tubos son de tapón amarillo ya que el análisis de la S100 se hace en suero, no en plasma. Por tanto, la muestra debe dejarse coagular y el tiempo y velocidad de la centrifugación es mayor.
DIAPOSITIVA 9.
La técnica que emplearemos es la técnica inmunológica Sandwich. En esta diapositiva tenemos representados los pasos principales. En un primer paso, la muestra se incuba con un anticuerpo Anti-S100 marcado con biotina y un anticuerpo Anti-S100 marcado con un complejo de rutenio durante 9 minutos. La proteína S100 queda así marcada. Posteriormente en un segundo paso el complejo Sandwich formado se incuba con micropartículas paramagnéticas recubiertas de estreptavidina, otra vez durante 9 minutos. El complejo Sandwich se adhiere a estas partículas paramagnéticas a través del anticuerpo biotinizado. Ya por último se transporta a la cubeta de medición, se lava con disolución de limpieza para separar el complejo Sandwich del resto de la muestra, se hace la reacción ECL y se mide la señal analítica.
DIAPOSITIVA 10.
En esta diapositiva vemos con detalle en qué consiste la reacción electroquimioluminiscente.
Para ello necesitamos el complejo Sandwich (recordemos que contiene un complejo de rutenio) y la tripropilamina. Por aplicación de un voltaje se crea un campo EM que atrapa a estos dos compuestos en la superficie del electrodo. Vemos que la TPA se oxida en el electrodo, pierde un electrón formándose un radical que expulsa un protón y un electrón que capta el complejo Sandwich. Éste pasa a un estado excitado, para pasar al estado fundamental emite radiación EM, que es captada y medida por un tubo fotomultiplicador. La señal es directamente proporcional a la concentración de analito.
DIAPOSITIVA 11.
Esta técnica tiene un rango de medida entre 0,005 y 39,000 / . La dilución automática es 1/5, pero en el caso del uso de la proteína S100 como marcador ante el TCE no será necesaria: el punto de corte para el diagnóstico está fijado en 0,100 / , cuando el resultado sea superior al límite máximo de la técnica se informará como valor superior al máximo de la curva máster. Se pasarán dos tipos de controles (alto y bajo), cuyos valores para la S100 los tenemos representados en esta tabla. Esta técnica no muestra interferencias frente lipemia, ictericia o fármacos de uso hospitalario, entre otros.
DIAPOSITIVA 12.
Para finalizar, expongo aquí las principales conclusiones.
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