T6. Medios de cultivo (2016)

Apunte Español
Universidad Universidad Autónoma de Barcelona (UAB)
Grado Biología - 2º curso
Asignatura Microbiologia
Año del apunte 2016
Páginas 4
Fecha de subida 19/04/2016 (Actualizado: 25/04/2016)
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La conservación a largo plazo y la de a corto plazo están al revés!

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TEMA6. MEDIOS DE CULTIVO.
Medios definidos: Composición exacta.
Medios complejos: La composición no es conocida completamente.
Medios usuales: Sólidos o líquidos que tienen los requerimientos mínimos para el crecimiento, sales, fuente de carbono y de nitrógeno.
Dentro de los complejos: Medios ricos: contienen un ingrediente extra. (agar sangre) Medios selectivos: Solo dejan crecer a un determinado tipo de bacterias. (Mc Conkey, solo crecen enterobacterias como la e.coli) Medios diferencial: Permiten ver diferencias entre las diferentes colonias que crecen. (Mc Conkey) En casos de gastroenteritis podemos encontrar: campylobacter, salmonella, Shigella y Yersinia.
Se usará una placa selectiva para campylobacter porque no es una enterobacteria y para las otras si que se usará mc Conkey.
El Mc conkey lleva: sales que inhiben a las gram + y cristal violeta que inhibe las que no son enterobacterias, lactosa y rojo neutro (indicador de pH).
Las colonias que crezcan y sean capaces de fermentar la lactosa, cogerán un color rojo a causa del rojo neutro. Las que no fermenten quedarán rosa pálido.
Las lactosa - son la salmonela, la shigella y la Yersinia. Lactosa + son las enterobacterias de la microbiota normal y no son patógenas : e.coli.
Si se encuentran estas lactosa - hay que seguir con la identificación.
Manitol Sal Agar: solo permite el crecimiento de staphylococcus.
La elevada concentración de cloruro sódico es lo que le hace ser tan selectivo.
Puesto que la mayoría de bacterias de nuestro organismos no pueden crecer a un porcentaje mayor de 5%. El manitol sirve para identificar si es la bacteria que encontramos en nuestro organismo de forma norma. Puesto que si es manitol positivo producen acido y cambian el color a amarillo. Staphilococcus epidermidis no da patologías.
MEDIOS PARA HONGOS.
Llevan más de glucosa. No son ni específicos ni diferenciados.
Medio de sabouraud.
PROTOZOOS Los protozoos no se cultivan en laboratorio, menos las Tricomonas vaginalis que se encontró un medio muy útil.
Se detectan en la muestra por observación al microscopio.
VIRUS Necesitan la presencia de células o animales para su cultivo. Estos son patógenos de persistencia intracelular obligada.
Los virus de la gripe se cultivan en los huevos embrionados de pollo. Ahora se empiezan a usar también medios celulares.
IDENTIFICACIÓN BIOQUIMICA.
API: Conjunto de medios de cultivo con los reactivos necesarios para hacer la prueba. Permite una rápida identificación de la bacteria (genero y especie). Para bacterias que crecen bien en 24-48h. El lado derecho es para observar la fermentación de azucares.
Estas pruebas se pueden hacer individualmente o en paneles con a demás el antibiograma.
Hongos: nos fijamos en la forma de los conilioforos (producción de esporas).
Pueden tardar 2 semanas hasta producirse.
Un hongo filamentoso no se puede analizar bioquimicamente porque los filamentos se incrustan dentro del agar y no puedes hacer una suspensión homogénea. Lo que se hace es la identificación por la estructura de los conilióforos. Se coge un celo y se pone encima de la colonia enganchando los colinióforos. Se pone una gota de azul de lactofenol que tiñe los conilióforos y se observan al microscopio (40X) Microsporum y epidermophyton: producen problemas en la piel y el cabello.
Virus: identificación por los efectos citopáticos característicos que producen en las células.
El virus de la polio hace que se desenganchen y queden redonditas y sueltas.
El virus respiratorio sincitial produce que se fusionen las células.
Varicela zoster: En el núcleo de la cell aparecen manchas viricos (cuerpos de inclusión de material virico) Detección de los microorganismos con anticuerpos específicos para sus antígenos.
IDENTIFICACIÓN POR DETECCIÓN DE ANTIGENOS.
- Técnicas de aglutinación.
- Inmunofluorescencia: detección de células infectadas.
Para la Chlamydia thrachomatis se necesita un medio de cultivo porque es un patógeno celular obligado.
- Enzimoimmunoanalisis: Hay de diferentes tipos. Como los directos, indirectos y los tipo sandwich.
El método en general consiste en unas placas que pueden ser desde 96 pocillos impregnadas del antígeno en cuestión inmovilizado. Este se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable, como cambio de color.
Otro método es que el pocillo en vez de contener el antígeno contenga el anticuerpo. El objetivo es detectar si una muestra contiene un antígeno en concreto.
Por último, el tipo sandwich, consiste en contener en el pocillo el antígeno, añadir la muestra que se sospecha que contiene el anticuerpo y posteriormente añadir otra solución que contenga un segundo anticuerpo capaz de unirse al primer anticuerpo. Este segundo anticuerpo debe contener un florocromo o otro elemento que permita la detección de la reacción. Aun que el cambio de coloración sea visible a simple vista (resultado cualitativo) gracias aun espectrofotómetro podemos saber la cantidad de reacción que se ha producido obteniendo así un resultado cuantitativo.
- Inmunocromatografia: Permite a partir de una colonia o una muestra detectar específicamente la presencia de microorganismos en 15 mins.
Es una cromatografia. El papel esta absorbido pero no pegado. El anticuerpo con una partícula de coloración se une al antigeno (1). El anticuerpo 2 esta enganchado a la tira y este también reconoce al antígeno.
El anticuerpo 3 ,que se encuentra enganchado en la tira, no tiene capacidad para reconocer al antígeno. Pero puede reconocer al anticuerpo 1. 
 La muestra debe ser liquida(fase liquida) puesto que debe subir por la tira(fase estacionaria).
El anticuerpo 1 también sube por capilaridad, al igual que los antígenos de la zona de anticuerpo 2. El anticuerpo 2 hace de ancla y atrapa los anticuerpo 1.
• Muestras positivas (+): se observa una raya de color azul, a causa de una concentración del color.
• Muestras negativas (-): Se observan dos rayas , la segunda es un control de calidad.
- Identificación de material genético.
 Utilización de sondas marcadas que identifican secuencias especificas del microorganismo.
- MALDITOF: espectrometria de masas. Ionizar una molécula y en el espectrometro de masas. Permite saber la masa molecular de un compuesto. 
 Se coge la colonia partiendo de un cultivo puro, se mete en el MALDITOF y junto con el espectrometro hacen un gráfico con las masas de las proteínas de esa bacteria. Cada microorganismo tiene un espectro especifico.
MÉTODOS DE CONSERVACIÓN Conservación de bacterias, virus o hongos que hemos aislado - A corto plazo: Haciendo pases de un medio a otro.
- A medio plazo: Congelación en soluciones acuosas con elevado contenido en materia orgánica como por ejemplo una solución que contenga un 20% de leche desnatada en polvo o en un 20% de glicerol.
- A largo plazo: liofilización, consiste en deshidratar una muestra congelada a la que se le ha hecho el vacío. Es pasa del estado solido a gas.
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